A fehérvérsejtszám kiszámítása

Elv. A leukociták számítása a mikroszkópia során a számláló kamra bizonyos számú négyzetében és számuk számítása 1 liter vérben, figyelembe véve a vér hígítását és a számláló kamra térfogatát.

Reagens: 3-5% -os ecetsavoldat, színezve a leukociták magjainak festésére néhány csepp metilén-kék oldattal. A megoldás kék színű, hosszú ideig tárolható.

A meghatározás folyamata. Egy száraz tesztcsőben 0,4 ml ecetsavoldatot öntsünk. 0,02 ml vért gyűjtöttünk egy ujjból (antikoaguláns stabilizált vénás vért használhatunk). Törölje le a pipetta csúcsát, majd fújja ki a vérből a cső aljára, keverje össze, tárcsázza újra és fújja fel a vér és a reagens keverékét (pipettázás). Jelölje meg a csövet, és hagyja el a számlálásig. Tárolja a vér keverékét ecetsav oldattal, legfeljebb 2-4 órán át.

A vért kémcsőben ecetsavval hígítjuk, alaposan keverjük össze és töltsük fel egy számláló kamrával. A töltött kamrát vízszintes helyzetben hagyjuk 1 percig a fehérvérsejtek leülepedése érdekében. A fényképezőgép vízszintes helyzetének megváltoztatása nélkül helyezik el a mikroszkóp asztalára, és kis nagyítással (10 ×, szemlencse 8 ×) 100 nagy négyzetben számolják be a fehérvérsejteket, ami 1600 kicsinek felel meg.

A nagyobb pontosság érdekében a leukocitákat nagy négyzetekben számítják ki a rácson, nem kis négyzetekre és csíkokra osztva, a rács bal felső sarkából indulva. A jobb kontraszt érdekében a látómező sötétedése, a kondenzátor leeresztése és a nyílás lezárása. A négyzeten belül elhelyezkedő és bármely két vonalon fekvő cellákat úgy számoljuk ki, hogy ne számoljunk be kétszer ugyanazt a cellát.

A leukociták számának kiszámítása a következő képlet szerint történik:

ahol X a leukociták száma 1 μl vérben; és - a leukociták száma 100 nagy négyzetben; 20 - vérhígítás; 100 a nagy négyzetek száma; 250 az 1 μl-re vonatkoztatott konverziós tényező, mivel az egyik nagy négyzet térfogata 1/250 μl (a négyzet oldala 1/5 mm, magassága 1/10 mm).

A gyakorlatban az 1 μl vérben a leukociták számának kiszámításához a 100 nagy négyzetben lévő számát 50-szeresével, 1 literben kell megszorozni, a kapott értéket pedig 106-mal meg kell szorozni.

Megjegyzés. A leukociták számításakor az esetek 6–8% -ában elkerülhetetlen a hiba.

1. A perifériás vérben a normociták nagy számával számolva a leukociták számát (mind a leukociták, mind a normociták - nukleált sejtek) számítják. Annak érdekében, hogy a leukociták számát megfelelően megállapítsuk, a nukleált vérsejtek teljes számából ki kell vonni a normociták számát.
2. A fennmaradó hibák hasonlóak a számláló kamrában lévő vörösvértestek számának kiszámításához.

Leukocita-szám

Vér összegyűjtése a leukocita keverőben a 0.5 jelzéssel. Azonnal adjunk a vérhez egy 3% -os ecetsav hígítóoldatot a 11. jelöléshez. Alaposan keverjük össze a kapilláris tartalmát és töltsük fel vele Goryaev kamráját. A számlálást legalább 100 nagy négyzetben végezzük. Ezek nagy vonalak nélküli vonalak, amelyek a Goryaev kamera rácsában négyre vannak csoportosítva. Számítsuk ki a leukociták számát 1 liter vérben a következő képlettel:

L = N x 4000 x 20 x 10 6

ahol: N a száz nagy négyzetben lévő leukociták száma; A 4000 olyan szorzó, amely egy kis négyzet térfogatát 1 μl térfogatra csökkenti; 20 - a vérhígítás mértékének korrekciója; 1600 - a leukociták száma kis négyzetekben; 10 6 - a mikroliták száma 1 literben.

Ajánlások a regisztrációhoz

Összefoglalva, hasonlítsa össze a kapott eredményeket a normál értékekkel.

Labor № 7.3

A vérben lévő hemoglobin mennyiségének meghatározása

194.48.155.245 © studopedia.ru nem a közzétett anyagok szerzője. De biztosítja a szabad használat lehetőségét. Van szerzői jog megsértése? Írjon nekünk | Kapcsolat.

AdBlock letiltása!
és frissítse az oldalt (F5)
nagyon szükséges

A fehérvérsejtszám kiszámítása

A leukocitózis abszolút (igaz) és relatív (újraelosztó) lehet.

Abszolút leukocitózist figyeltek meg akut gyulladásos folyamatokban, szöveti nekrózisban, akut bakteriális fertőzésekben (kivéve a tífusz, brucellózis, tularémia, stb.), Allergiás állapotok, rosszindulatú daganatok (szövetpusztulás), zárt fejsérülés és vérzés az agyban, diabétesz. urémiás kóma, sokk, akut vérveszteség, mint elsődleges reakció - sugárbetegséggel. A leukociták számának jelentős növekedése következik be a leukémia esetében.

A relatív (redisztributív) a leukocitáknak a depójához szolgáló szervekből történő véráramlásának következménye. Ez étkezés után következik be (élelmiszer-leukocitózis), meleg és hideg fürdők, erős érzelmek (vegetovascularis leukocytosis), intenzív izmok (myogen leukocytosis) stb.

Leukopenia. A leukopeniát a mérgező anyagok (arzén, benzol, stb.), A gyógyszerek (szulfanilamidok, kloramfenikol, butadion, immun, ciklofoszfamid stb.), Vírusok (influenza, vírusos hepatitis) hatásának gátlásának indikátoraként tartják számon., kanyaró, stb.), mikrobák (tífusz, brucellózis stb.), ionizáló sugárzás, röntgensugarak és hipersplenizmus (fokozott lépfunkció).

A leukocitózist és a leukopeniát ritkán jellemzik az összes típusú leukociták arányának arányos növekedése (csökkenése) (például a vér sűrűségével rendelkező leukocitózis); a legtöbb esetben bármely sejtfaj számának növekedése (csökkenése) van, ezért a "neutrofília", a "neutropenia", a "limfocitózis", a "limfopenia", az "eozinofília", az "eosinopia", a "monocitózis", a "monocitopénia" kifejezéseket használjuk. - Basophilia.

A leukociták számának változásainak klinikai értékelésében nagy jelentőséget tulajdonítanak a leukociták egyedi formáinak százalékos arányának, azaz a leukocita képletnek.

Egy egészséges ember leukocita vérének száma:

Relatív összeg Abszolút összeg

Basophils ……………………….0-1% 0-0.0650 x 10 9 / l

Eozinofilek …………………….0,5-5% 0,02-0,30 x 10 9 / l

Neutrofilek: - myelocyták............ 0% hiányzik

- szúrva... 1-6% 0,040-0,300 x 10 9 / l

- szegmentált….47-72% 2,0-5,5 x 10 9 / l

Limfociták …………………………….19-37% 1,2-3,0 x 10 9 / L

Monociták ……………………….3-11% 0,09-0,6 x 10 9 / L

A leukocita-számlálást festett perifériás vérkenetben végezzük. A leukocita képlet vizsgálatának eredményeinek helyes értelmezése érdekében ajánlott abszolút mennyiségben, de nem relatív értékekben számolni. Romanovsky-Giemsa, Pappenheim legelterjedtebb festési módszerei. Merítés alatt legalább 200 sejtet számolunk, majd az egyes típusú leukociták százalékos arányát kapjuk. A leukogram elemzése, figyelembe véve az egyéb vérparamétereket, és a klinikai kép értékes vizsgálati módszer, segít a diagnózisban és a betegség prognózisának meghatározásában.

A neutrofília fő okai.

Akut bakteriális fertőzések - lokalizált és általánosítottak.

A szövet gyulladása vagy nekrózisa.

Gyógyszerhatások (kortikoszteroidok).

A neutropenia fő okai.

Fertőzések - bakteriális (tífusz, brucellózis, tularémia, paratifózis) és vírus (fertőző hepatitis, kanyaró, influenza, rubeola és mások).

Myelotoxikus hatások és a granulocytopoiesis elnyomása (ionizáló sugárzás; kémiai anyagok - benzol, anilin, DDT; gyógyhatások - citosztatikumok és immunszuppresszánsok; B-vitamin)₁₂-folsavhiányos anaemia, akut aleukémiás leukémia, aplasztikus anaemia).

Antitest expozíció (immunformák) - gyógyszerekkel szembeni túlérzékenység, autoimmun betegségek (SLE, reumatoid arthritis, krónikus nyirokleukémia), izoimmun megnyilvánulások (az újszülött hemolitikus betegsége).

A szervek újraelosztása és lerakódása - sokkállapotok, splenomegáliás betegségek és hipersplenizmus.

Örökletes formák (családi jóindulatú krónikus neutropenia).

Az eozinofília fő okai.

Parazita inváziók (trichinózis).

Krónikus bőrelváltozások - psoriasis, pemphigus, ekcéma.

Tumorok (leukémia eozinofil változatai).

Egyéb betegségek - fibroplasztikus endocarditis Lefflera, skarlát.

A fertőzések és a gyulladásos betegségek gyógyulási fázisában (kedvező prognosztikai jel).

Az eozinopenia (aneozinofília) okai.

Megnövekedett adrenokortikoszteroid aktivitás a szervezetben.

A basophilia fő okai:

Krónikus mieloid leukémia és eritrémia.

A monocitózis fő okai.

Subakut és krónikus bakteriális fertőzések.

Parazita fertőzések - leishmaniasis, malária.

Hemoblasztózis - monocita leukémia, lymphogranulomatosis, limfómák.

Egyéb feltételek: SLE, szarkoidózis, reumatoid arthritis, fertőző monocitózis; a fertőzésekből való kilábalás időszakában, amikor az agranulocitózist elhagyjuk, a splenectomia után.

A monociták számának csökkenése főként a pulmonalis tuberkulózisban a limfocita-monocitikus arány értékelésében fontos.

A limfocitózis fő okai.

Fertőzések - akut vírus (fertőző mononukleózis, kanyaró, rubeola, csirke), krónikus bakteriális (tuberkulózis, szifilisz, brucellózis), protozoa (toxoplazmózis).

Hemoblastózis (lymphocytic leukemia, lymphoma).

Egyéb betegségek - hyperthyreosis, Addison-kór, B-vitamin₁₂-folsavhiányos anaemia, hipo-és aplasztikus anaemia.

A limfocitopeniát SLE, Hodgkin-betegségben, a nyirokcsomók széles körben elterjedt tuberkulózisában, a veseelégtelenség végső stádiumában, akut sugárbetegségben, immunhiányos állapotokban, glükokortikoidok alkalmazásával figyelték meg.

A vérben lévő bizonyos típusú leukociták számának növekedése vagy csökkenése relatív vagy abszolút. Ha csak egy bizonyos típusú fehérvérsejt változik, akkor a relatív neutrofília, a relatív eozinopenia stb. Bármilyen típusú leukociták abszolút tartalmának növekedését vagy csökkenését, azaz a sejtek térfogategységére vonatkoztatva, abszolút neutrofília, abszolút eozinopenia, stb.

A képlet balra történő eltolása (a neutrofilek fiatal formáinak számának növelése) a gyulladás vagy nekrotikus folyamat jele a szervezetben.

A leukocita képlet jobbra történő eltolódása a sugárzás betegségére és a B-vitaminra jellemző₁₂-folsavhiányos vérszegénység.

Az összes típusú szemcsés leukociták - granulociták (neutrofilek, eozinofilek, bazofilek) számának hiányát vagy jelentős csökkenését az agranulocytosis kifejezés jelöli. Az előfordulási mechanizmustól függően megkülönböztetik a myelotoxikus (ionizáló sugárzás, citosztatikus bevitel) és immunrendszer (hapten és autoimmun agranulocitózis) hatásait.

Leukocita-szám

A számlálási módszer a kamerában. A cső módszerével előállított vér vétele és hígítása. A csőbe (előnyösen Vidalevskaya) 0,4 ml hígítófolyadékot és 0,02 ml kapilláris vért vezetünk be. A kapott hígítást gyakorlatilag 1:20-nak kell tekinteni. Hígítószerként általában metilén-kék színnel színezett 3-5% -os ecetsav oldatot használunk (ecetsav lizesíti az eritrocitákat, a metilén-kék foltok a leukociták magjait). A kamra feltöltése előtt a Goryaeva csövet hígított vérrel alaposan megrázzuk. A kamrát ugyanúgy töltjük be, mint a vörösvérsejt-számlálásnál.

A leukociták sokkal kisebbek, mint a vörösvérsejtek (1–2 nagy négyzetenként), ezért a pontosság érdekében 100 nagyméretű négyzetben (nem osztályozva) számolnak. Számítás: 100 nagy négyzetet (1600 kicsi) leukocitának számítunk.
Emlékeztetve arra, hogy egy kis négyzet térfogata 1/4000 mm3, és a vér 20-szor hígul, a leukociták számát 1 μl vérben számítják ki: 4000 20 és osztva 1600 = a x 1/2. Gyakorlatilag az 1 μl vérben a leukociták tényleges tartalmának eléréséhez elegendő a számításban kapott szám felét felosztani és hozzáadni 2 nullát. Az átlagos módszerhiba ± 7%.

Pontosabb (2-3% -os hiba) és tökéletes a leukociták száma elektronikus eszközökkel. A részecskeszámolókban leukociták számítását ugyanazzal az elvvel végezzük, mint az eritrocitákat. A pre-vér hígítjuk és összekeverjük a vörösvértesteket lizáló reagensekkel. A „Technicon” autoanalizátorban ecetsav oldatot használnak, mint „Culter” és „Celloskop” eszközökben - szaponin vagy sapoglobin, amelyet hígított (1: 500, 1: 700) adnak izotóniás nátrium-klorid-oldatban (6 csepp 20 ml-enként) hígítás).

A vér leukocitaszámlálását festett perifériás vércukorokkal végezzük.
Jobb, ha a legkisebb pontot a kenet vége közelében kell számolni, legalább 200 sejtet (kivéve a kifejezett leukopeniát), majd a fehérvérsejtek bizonyos típusainak százalékos arányát. A számlálást ugyanabban a sorrendben ajánljuk: a sejtek felét a csúcson, a stroke alján felét kell számolni, anélkül, hogy a széléhez és középpontjához kellene menni, a zigzagolás (3-4 látómező a löket mentén, 3-4 mező a sztrájk közepére derékszögben, majd 3-4 mezőt a szélével párhuzamos oldalra, ismét jobbra és felfelé, így az egyik oldalra).

Kenőcsök előkészítése. Az óvatosan mosott és zsírtalanított üveg (annak szélén) az injekció helyén egy csepp vér ér. A kenet az üvegcsiszolást teszi lehetővé, 45 ° -os szögben, a csepp előtt lévő csúszda felé. Miután a poharat ebbe a cseppbe hozták, várják, amíg a vér elterjed a szélén, majd gyors, gyors mozdulattal előre hajtja a csiszolót, és nem veszi el a tárgytól, mielőtt kiszárítja az egész cseppet.

A megfelelően elkészített kenetnek sárgás színű (vékony), nem éri el az üveg széleit, és nyomokban (bajusz) végződik.

Az előzetes rögzítés után keletkező száraz kenet festése. A legjobb rögzítést abszolút metilén-alkoholban (3-5 perc) vagy Nikiforov egyenlő mennyiségű abszolút etanol és éter elegyében (30 perc) érjük el.

A fő hematológiai festékek közé tartoznak a metilén-kék és a származéka - azúrkék I. (metilén-azure) és az azure II (azúrkék I és a metilén-kék egyenlő részének keveréke), a savas - vízoldható sárga eozin.

● Romanovsky-Giemsa festménye. A Romanovsky-Giemsa festék (gyárilag gyártott) az alábbi összetételű: Azur II - 3 g, vízben oldódó sárga eozin - 0,8 g, metil-alkohol - 250 ml és glicerin - 250 ml. A festékoldatot 1,5-2 csepp kész festék 1 ml desztillált vízre állítjuk elő. A festéket egy esetlegesen magasabb réteggel öntsük; színezés ideje - 30-35 perc Ezután az edényeket vízzel mossuk és levegőn szárítjuk. Ezzel a módszerrel a mag jól elkülönülhet, de a citoplazma neutrofil granularitása sokkal rosszabb, ezért széles körben alkalmazzák a perifériás vérfolt festésére.

● A May-Grunwald-Romanovsky-Giemsa kombinációja Pappenheim szerint. A kész festéket, egy May-Grunwald-féle fixálószert, amely az eozin-metilén-kék metilén-alkoholban készült oldata, fixált kenetre pipettázzuk 3 percig. 3 perc elteltével az oldathoz tartozó festékhez azonos mennyiségű desztillált vizet adunk, és a színezést további 1 percig folytatjuk. Ezt követően a festéket leöblítjük, és a kenetet levegőben szárítjuk. Ezután a szárított kenetet frissen elkészített Romanovsky festék vizes oldatával átfestjük 8-15 percig. Ezt a módszert a legjobbnak tekintjük, különösen a csontvelő-szennyeződések esetében.

A perifériás vérben a leukociták számának növekedését a normális szint fölött leukocitózisnak nevezik, a csökkenést leukopeniának nevezik. A leukocitózist (leukopeniát) ritkán jellemzi az összes típusú leukociták arányos növekedése (csökkenése), például a vér sűrűségével járó leukocitózis. A legtöbb esetben a sejtek száma (csökkenés) növekszik. A vérben az egyes típusú leukociták számának növekedése vagy csökkenése relatív vagy abszolút lehet, a teljes leukocita-számtól függően - normális, emelkedett vagy csökkent. A leukociták számának, egyéni formáinak és morfológiájának a változása függ a kórokozó típusától és virulenciájától, a patológiai folyamat természetétől, lefolyásától és mértékétől, a szervezet egyedi reakciójától.

Leukociták (leucocytus)

A leukociták. A leukociták mennyiségi meghatározása. Leukociták számítása a Goryaeva kamerával. A leukociták mennyiségi tartalma. Leukocytosis.

Fehérvérsejtek

A vérben levő leukociták száma mind a kialakulásának sebességétől, mind a csontvelőtől való mozgósításától, valamint a szövetekbe történő bevándorlástól és a szövetekbe (a léziókig) történő mozgástól, a tüdőtől és a léptől függ. Ezeket a folyamatokat viszont számos fiziológiai tényező befolyásolja, ezért az egészséges személy vérében lévő leukociták száma ingadozásnak van kitéve: a nap végére emelkedik, fizikai terhelés, érzelmi stressz, fehérjetartalmú élelmiszerek bevitele és a környezeti hőmérséklet hirtelen változása.

A leukociták mennyiségi meghatározása

A leukocitákat a Goryaev kamerával számolják, és automatikus számlálókat használnak.

Leukociták számítása a Goryaeva kamerával

A vér leukociták számolásának in vitro módszerével:

• A csőbe 0,4 ml metilén-kék színnel színezett 3-5% -os ecetsav oldatot öntünk. Kapilláris pipettával 20 μl vért húzzunk friss cseppből (hígítás 20-szor), óvatosan fújjunk fel egy kémcsőbe egy reagenssel és öblítsük ki a pipettát. Keverjük jól;
• egy tiszta és száraz fedőlapot dörzsölnek a kamrára úgy, hogy a szivárványgyűrűk a kontaktpontban alakuljanak ki;
• a kémcsőben hígított vért jól keverjük össze. A kerek üvegrúd vége egy csepp vért vesz fel, és a kamra csiszolt üvegének széléhez jut;
• a kamra betöltése után 1 percig marad le a leukociták üledékképződéséhez;
• A leukocitákat alacsony nagyítással (objektív × 8 vagy × 9, szemlencse × 10 vagy × 15) tekintjük sötétített látómezővel (csökkentett kondenzátor vagy szűkített membrán);
• kielégítő eredmények érdekében a leukocitákat 100 nagy négyzetben számoljuk.

Ismerve a nagy tér térfogatát és a vér hígítási fokát, keressük meg a leukociták számát 1 μl és 1 l vérben. A nagy négyzet oldala 1/5 mm, a terület 1/25 mm2, a tér fölötti térfogata 1/250 mm3.

A fehérvérsejtek számolásának képlete:

ahol B a leukociták száma 100 nagy négyzetben;
P - a hígítás mértéke (20).

Leukocita-szám

Norm: 4,0–9,0 × 10 9 / L

9,0 × 10 9 / l feletti leukociták számának növekedését hívjuk
leukocitózis, számuk csökkenése 4,0 × 10 9 / l alatt - leukopenia. Ugyanakkor még az egy l-es leukocitákban is 3,5 × 10 9-et lehet alkalmazni az egyének számára. Az irodalom szerint ezek az emberek fokozott immunrezisztenciát mutatnak, és kevésbé valószínű, hogy megbetegszenek, ami úgy tűnik, az immunválasz szükségessége a szövetekben lévő leukociták tartalékának megtartására, ahol 50–60-szor több a véráramban. Nyilvánvaló, hogy a perifériás vérben alacsony fehérvérsejtszámú egészséges egyénekben a szövetekben lévő tartalmukat ennek megfelelően növelik. Ezt a jelenséget az örökletes és családi jelleg vagy a paraszimpatikus idegrendszer hatásának növekedése magyarázza.

A leukopenia funkcionális és szerves lehet.
A funkcionális leukopénia a vérképződés szabályozatlanságával jár és megfigyelhető:

• bizonyos bakteriális és vírusos fertőzésekkel (tífusz, influenza, himlő, rubeola, Botkin-kór, kanyaró);
• gyógyszerek (szulfonamidok, fájdalomcsillapítók, görcsoldószerek, antithyroid, citosztatikus és egyéb gyógyszerek) hatására;
• az izmos munka során idegen fehérje bevezetése, ideg- és hőmérséklethatások, éhezés, hypotonikus állapotok;
• a hamis leukocitopénia összefüggésben állhat a leukocita aggregációval a vér hosszú ideig tartó tárolása során szobahőmérsékleten (több mint 4 óra).

A csontvelő aplasia által okozott szerves zsírszövet és a zsírszövetrel történő cseréje akkor következik be, ha:

• aplasztikus anaemia;
• agranulocytosis;
• leukopénikus leukémia;
• Hodgkin-betegség bizonyos formái;
• ionizáló sugárzás;
• hipersplenizmus (primer és szekunder);
• kollagén betegségek.

leukocytosist

A leukocitózis a hematopoetikus rendszer reakciója
exogén és endogén tényezők. Vannak fiziológiai és kóros leukocitózisok.

A fiziológiai leukocitózis:

• emésztés - étkezés után, különösen magas fehérje; a leukociták száma nem haladja meg a 10,0–12,0 × 10 9 / l-t, és 3-4 óra múlva visszatér a normális értékre;
• érzelmi stressz (adrenalin), súlyos fizikai erőfeszítés, hűtés, túlzott napsugárzás (napégés), számos hormon (katecholaminok, glükokortikoszteroidok stb.) beadása a terhesség második felében, menstruáció alatt és a leukociták egyenlőtlen eloszlása ​​miatt a vérben a mainstream.

A patológiai leukocitózis abszolút és relatív.

Abszolút leukocitózis - a vérben lévő leukociták számának növekedése több százezerre (100,0–600,0 × 10 9 / l és annál több).

• Leggyakrabban leukémia esetén: krónikus leukémiában - az esetek 98-100% -ában - akut leukémiában - 50-60% -ban. A leukocita sejtek arányának megváltoztatása a csontvelőben és a vérpunkcióban a leukémia diagnózisának alapja.

Relatív leukocitózist figyeltek meg:

• akut gyulladásos és fertőző folyamatok, kivéve a tífusz, influenza, himlő, rubeola, Botkin-kór, kanyaró. A legnagyobb leukocitózist (70,0–80,0 × 10 9 / l-ig) a szepszisben figyelték meg;
• mérgező anyagok (rovar mérgek, endotoxinok), ionizáló sugárzás hatására (közvetlenül a besugárzás után);
• a kortikoszteroidok, az adrenalin, a hisztamin, az acetilkolin és a digitalis készítmények hatására;
• szöveti szétesés (nekrózis), miokardiális infarktus, perifériás artériák trombózisa, gangrén, égési sérülések, exudatív pleurita, perikarditis, urémia, májkóma kialakulásával;
• jelentős vérveszteség a sérülések, belső, nőgyógyászati ​​és egyéb vérzések miatt.

A fertőző betegségekben lévő leukociták számának növekedése a legtöbb esetben a leukocita képlet balra történő eltolásával jár.

A leukociták és a vérlemezkék számának számítása

A fehérvérsejtek vizsgálatának helyességét befolyásoló tényezők

- a vér hosszú tárolása szobahőmérsékleten

A vérben lévő leukociták tartalmának normái

Kor A leukociták száma

- 1 nap 11,6 - 22,0

- 1 hét 8.1.- 14.3

- 1 hónap 7,6 - 12,4

- Felnőttek 4,0 - 9,0

Módszerek a vérben lévő leukociták számának meghatározására.

- Számláljuk a leukociták számát a számláló kamrában

- Leukociták számítása hematológiai analizátorokban

A leukociták számának meghatározása a számláló kamrában.

- A leukociták mikroszkóp alatt történő számlálása a vörös vérsejtek lizálása után történik a számláló rács 100 nagy négyzetében, és 1 liter vérre újraszámítva, a négyzetek térfogata és a vér hígítása alapján. A leukociták számát a vérgyűjtés után 2-4 órán belül kell elvégezni.

- Ha a perifériás vérben nukleáris vörösvérsejtek vannak, akkor azokat nem lizáljuk és leukocitákkal együtt nem számoljuk. Ebben az esetben a leukociták tényleges számának meghatározásához a piros sorban lévő sejtek számát levonják a számított sejtek teljes számából.

- Például: A kamrában (vagy analizátorban) a számításban szereplő leukociták teljes száma -45x109 / l. A leukocita képlet kiszámításakor azt találtuk, hogy 50 eritroblaszt (normoblaszt) van jelen 100 leukocitánként.

Kiszámítjuk a vérben lévő leukociták számát:

150 sejt - 45 x 109 / l

100 sejt (leukociták) - X

X = 100 * 45 * 10 / l / 150 = 30 * 10 / l

Így a vérben a leukociták tényleges száma 30 x 109 / l.

A kamrában a leukociták számításánál jelentkező hibák fő forrásai:

- A vér és az ecetsav térfogatának helytelen aránya egy kémcsőben.

- Helytelenül elkészített ecetsavoldat (5% -nál nagyobb koncentrációban egyes leukociták lizálhatnak, ami az eredmény alulbecsléséhez vezet).

- 28 ° C feletti hőmérsékleten a minta hosszantartó expozíciója, amely felgyorsíthatja a mintában levő leukociták lízisét, és alulbecsüli az eredményt.

- A Goryaev kamra helytelen töltése. A vörösvértestek kiszámításához hasonlóan, a kamerát 1 percig kell hagyni a sejtek letelepedéséhez.

- A Goryaev kamera nem volt elég jól mosva az előző definíció után. A kamrában maradt leukociták túlbecsülhetik az elemzés eredményeit.

Trombocita számítási módszerek

- a számláló kamrában

Mindegyik módszercsoportnak előnyei és hátrányai vannak.

- A vérlemezkék számítása a kamrában elég pontos, nem szükséges a vörösvértestek számának kiszámítása. Másrészről ez a módszer sokkal fáradságosabb, mivel a natív formában lévő vérlemezkéket kis és rosszul kontrasztos elemek képviselik. A módszer hátránya a vérvétel után a következő órákban a vérlemezkeszámolás.

- A vérlemezkék számának meghatározása szignifikánsan alacsonyabb, mint a kamra módszer vagy az automatikus számlálók. A vérfoltok számolásánál jelentkező hibák a kenet rossz minőségéből és a vérlemezkék egyenetlen eloszlásából adódhatnak, a vörösvértestek számának pontatlan meghatározása. A módszer jelentős hátránya a vérlemezkék és a vörösvérsejtek egyidejű számlálása a vérben. Ennek előnye a vérlemezkék tanulmányozásának képessége, függetlenül a vérgyűjtés időpontjától.

- A vérlemezkék hematológiai analizátorral történő meghatározásának módszere lehetővé teszi a vérlemezkék számának, átlagos térfogatának és térfogat szerinti eloszlásának pontos meghatározását.

Leukocita-szám

A leukociták számát egy automatikus számlálóval vagy egy Goryaev kamrában számítják ki. A kamrában lévő leukociták számításához Turk-folyadékot készítünk - ecetsavoldatot, amelyet metilén-kék vizes oldatával színezünk (0,1 ml 0,1% -os metilén-kék oldatot adunk 9 ml 10% -os ecetsavhoz). Egy kémcsőben 0,4 ml folyékony Türk-t öntsünk. Pontosan 0,02 ml vért szerezzünk, óvatosan adjuk hozzá a hígítófolyadékhoz. A vér hígítása 1:20. Keverjük össze és hagyjuk 4 percig hagyni. Töltse fel a Goryaeva kamrát, miután gondosan megrázta a hígított vért. A fényképezőgépet 1 percig sík felületen hagyjuk leukociták üledékének megtisztításához. Ezután a leukocitákat a mikroszkóp alacsony nagyításánál (lencse 8, 10 vagy 15 szemlencse) a sötét látómezővel (a kondenzátor leeresztésével vagy a szűkített membránnal) számoljuk. A leukocitákat 100 nem publikált nagy négyzetben tartják, ami 1600 kis értéknek felel meg. A nagyméretű négyzetekben lévő sejtek számlálásának eredményei összefoglalják és kiszámítják számukat 1 μl vérben a következő képlettel:

ahol X a leukociták száma 1 μl vérben; A - a 100 nagy négyzetben számolt cellák száma, 1600 - a kis négyzetek száma; 20 - vérhígítás; A 4000 egy szorzó, amely 1 μl mennyiségű vért eredményez, egy kis négyzet térfogata alapján (1/4000 μl).

A leukocita-képlet számítása A festett perifériás vércikkeket vizsgáljuk. A vérsejtek morfológiai jellemzőinek helyes figyelembevételének feltétele egy megfelelően elkészített és jól festett vér kenet. A száraz, tiszta, jól zsírtalanított lemezeken vérkenetet készítünk, Nikiforov (96 ° C és dietil-éter 1: 1) elegyében. A hosszú élek üveglemezének megérintésével érintse meg a felületét egy csepp vérre (de nem bőrre), amely a szúrásból szabadul fel, vagy mikropipettával vagy kapillárral csepegtethet egy csepp vér. A szűk élek érdekében az asztalon vagy a bal kézen üveglapot tartanak. Használja a jobb oldalt a pohárba a pohárba a vérrel a csepp bal oldalán, 45 ° -os szögben, és tolja jobbra, amíg megérinti a vért. Várják, amíg a vér az őrölt üveg teljes szélén elterjed, majd egy gyors, gyors mozdulattal jobbról balra vezet, amíg a teljes csepp kimerül. Egy csepp vérnek kicsinek és arányosnak kell lennie, hogy az egész kenetet az üvegre helyezzék, és ne érje el a szélét 1-1,5 cm-rel. Egy jól elkészített kenet vékony, sárgás színű és "seprű". A levegőn szárított vérfoltokat rögzítéshez speciális edényekben vagy rögzítő folyadékkal (metil-alkohol, 3-5 perc; rögzítési idő: 3-5 perc; 30 perc; Nikiforov keverék, 20-30 perc) töltött szokásos üvegüvegekbe helyezzük. A rögzített készítményeket levegőben szárítjuk, majd Romanovsky-Giemsa festékkel festjük. A kész festékoldat Romanovsky-Giemsa (azureozin) 1:10 arányban hígítva a festéshez szükséges térfogatban. A rögzített kenetet hígított festékkel öntjük, amelyet egy esetlegesen magasabb réteggel öntenek a kenetre. A színezés a helyiség levegő hőmérsékletétől függően 25-45 percig tart. A festék befejezése után mossuk le a festéket desztillált vízzel, és függőlegesen helyezzük a stroke-ot egy szárítóhoz. A vércsipesz mikroszkópiáját 100 × 10 nagyítással merítjük. A leukociták számítását zigzagvonal mentén végeztük („Meander line”), 100-200 sejtet számolunk, figyelembe véve a leukociták egyedi formáinak számát: stab és szegmentált neutrofilek, eozinofilek, bazofilek, monociták, limfociták. Számítsa ki az egyes sejttípusok százalékos arányát.

A fagociták és limfociták abszolút számának számítása A fagociták (neutrofilek és monociták) és a magasabb gerincesek limfocitáinak abszolút számát a perifériás vérben és a leukocita képletben lévő leukociták számának adatai alapján számítják ki.

Phagocytic funkció teszt

A fagocita index és a fagocita szám meghatározása

Számos technikát fejlesztettek ki a leukociták felszívódási és emésztési aktivitásának értékelésére. Mindegyikük a fagociták azon képességén alapul, hogy elnyeljék a tesztrendszert alkotó idegen részecskéket (egy adott típusú mikroorganizmus, zimozán, latex - az abszorpció tárgya). A kinyilatkoztatást in vitro vagy in vivo végezzük. Az általános meghatározás a következő: Heparinizált vagy citrált frissvért (vagy fagocita szuszpenziót) azonos térfogatú, szuszpendált mikrobiális szuszpenzióval (Saccharomyces cerevisiae, Staphilococcus aureus, S. albus, E.coli, A. nydrophila) vagy más abszorpciós objektummal keverünk. A keveréket óvatosan összekeverik és termosztátba helyezik (37-40ºС - melegvérű, a test normál hőmérsékletétől függően, 26 ° C - a hőhordozó halak számára és alacsonyabb a hideg-szerető). 15, 30, 45, 60 és 90 perc elteltével a szennyeződéseket szilikonokra készítjük, szárítjuk, metil-alkohollal vagy Nikiforov-keverékkel rögzítjük, és Romanovsky-Giemsa szerint festjük. Az immerzió alatt a kenetet vizsgálják, és meghatározzák a fagociták aktivitását - a fagocitózisban résztvevő fagociták százalékos arányát, a fagocita indexet - az egyik fagocita leukocita által rögzített vizsgálati mikrobák számát, a fagocita számot - az 1 aktív neutrofilre jutó fagocita objektumok átlagos számát. A mutatók különböző időintervallumokon történő értékelése lehetővé teszi a fagocitózis dinamikájának becslését. Általában 90 perc elteltével a fagocita indexnek alacsonyabbnak kell lennie, mint a 45 perc és 60 perc után, a mikrobák emésztése miatt. Az emésztés megsértése esetén ez nem változik.

A fagociták funkcionális aktivitásának értékelése a nitro-kék tetrazol redukciós reakciójával (NBT-teszt)

Ez a teszt a fagociták baktericid funkciójának indikátora és lehetővé teszi, hogy értékeljék az oxigénfüggő leölés képességét. Amikor ez a leölési mechanizmus aktiválódik, aktiválódik a NADPH-oxidáz enzim, ami a reaktív oxigénfajok megjelenéséhez vezet. Az ilyen anyagok felszabadulását a sejtben oxigén (légzőszervi) robbanásnak nevezzük, amelyet az NBT teszt segítségével lehet regisztrálni. Ennek a vizsgálatnak a megfogalmazásánál a nitrozinium-tetrazolium anyagot hozzáadjuk a fagocitákhoz, a sejt abszorbeálja, és reaktív oxigénfajok jelenlétében sötétkék színű diformazánvá alakul át. Minél több sötétkék granulátum van rögzítve a felületre vagy a fagocita belsejébe, annál aktívabb oxigénformák keletkeznek, annál inkább oxigénfüggő leölés.

Az NBT teszt két változatban van: spontán és indukált. A spontán NBT-teszt létrehozásakor a fagocitákat NST jelenlétében tenyésztjük a sejtek előzetes aktiválása nélkül, az indukált NBT-teszt végrehajtásakor a fagocita reakció aktivátorát adjuk a tenyésztőközeghez. Az NBT teszt két változatban történő beállítása lehetővé teszi a sejtek funkcionális tartalékának kiszámítását, amely az indukált diformazán-pozitív sejtek száma (intenzitása) és a spontán diformazán-pozitív sejtek száma (intenzitása) közötti különbség. Az indukált NBT teszt értékei antigén stimulus jelenlétében jellemzik a fagocita sejtek aktivitását, és a teljes fagocitózisra való felkészültségük kritériuma. A spontán NBT-teszt lehetővé teszi, hogy megbecsüljük a nem aktivált fagociták oxigénfüggő leölési mechanizmusainak aktiválódási fokát. Az intracelluláris mikrobicid rendszerek aktiválásának mértékét jellemzi.

Spontán NBT-teszt létrehozásához 0,05 ml 0,2% -os NBT-oldat kálium-foszfát pufferben (0,1, pH 7,3) és 0,05 ml azonos puffert adunk 0,1 ml vérhez. Ezzel párhuzamosan egy mintát kell elhelyezni az indukált NBT teszt vizsgálatára, amelyben 0,05 ml puffer helyett ugyanazt a térfogatú fagocita aktivátort adjuk (például pirogén, 50 μg / ml koncentrációban). A reakcióelegyet vízfürdőben 37 ° C-on (30-60 perc) hőkezeljük. Közepes sűrűségű kenetet készítünk, levegőn szárítjuk és etil-alkohol vagy Nikiforov keverékben (20 perc) rögzítjük, majd semleges piros vizes oldattal (0,1%, 1 perc) festjük.

A reakció után a vérkenetet bemerítéssel mikroszkóppal (100 × lencsék, 10 × szemlencsék). A 100 sejt közül a diformazán granulátumot tartalmazó aktivált neutrofilek (DAN,%) arányát számoljuk. A sejtekben lerakódott dipherformazán mennyisége szerint az aktivitását tetszőleges egységekben értékelik, és a neutrofil aktivációs indexet (IAN, használt egységek) kiszámítjuk:

hol van H_neg. - a diformazán granulátumot nem tartalmazó sejtek száma;

H₁ - azon sejtek száma, amelyekben a diformazán lerakódás területe kevesebb, mint a mag területének 1/3-a;

H₂ - azon sejtek száma, amelyekben a diformazán lerakódása 1/3-tól a mag teljes méretéhez viszonyítva;

H₃ - azon sejtek száma, amelyekben a diformazán lerakódások a mag nagyobb területét foglalják el.

A mobilizációs együttható (KM) a következő képlet alapján történő levezetése: t