A hepatitis C a májsejtek gyulladása, amely a HCV-vírussal (hepatitis C) való fertőzés következtében fertőzött személy vérével érintkezik. A HCV flavivírus genetikai kódját egy RNS (ribonuclenic acid) molekula hordozza a vírus szerkezetében. Ezt az életveszélyes jelenséget a titoktartás jellemzi a patológia kezdeti szakaszában. A fertőzés és a tünetek megjelenése közötti időintervallum (az immunrendszer válasza) egy hónaptól hat hónapig terjedhet. Általában a betegség krónikus formát ölel, és nehéz gyógyítani.
A modern orvostudomány lehetővé teszi, hogy kórosan diagnosztizálja a károsodást. A leggyakoribb és leghatékonyabb diagnosztikai módszerek közé tartozik a PCR-elemzés. Ebben a cikkben fontolja meg, hogy mi az és milyen fajta létezik.
Mi a tanulmány
A hepatitis C PCR-analízise laboratóriumi vizsgálat, amely kimutatja a ribonukleleninsav (RNS) genetikai anyagát. Meghatározza a vérben lévő RNS-molekulák számát, a biológiai anyag minőségét, a HCV-vírus genetikai típusát.
A C-hepatitis PCR-módszere lehetővé teszi a flavírus minimális mennyiségének kimutatását az antitestek kialakulása előtt, általában a fertőzés után.
A vizsgálatot gyakran RNS-elemzésnek nevezik, mivel a flavavírusban lévő 30-60 nm méretű ribonukleinsav-részecskéket észleli.
A vizsgálatot az alábbiak szerint végezzük: üres gyomorban a páciens vénából vért ad, amelyet ezután különböző módszerekkel tesztelnek:
- A valós idejű PCR-t zárt, automatizált módon hajtjuk végre, és az RNS-vírus kimutatásának határértéke 15 IU / ml;
- COBAS AMPLICOR 50-100 NE / ml érzékenységgel.
Minél magasabb a diagnosztikai technika érzékenységének küszöbértéke, annál nagyobb a valószínűsége annak, hogy a vizsgált biológiai anyagban megtalálják a legalacsonyabb vírustartalmat.
Milyen típusú elemzés használható
A több évtizede sikeresen használt elemzést PCR hepatitisnek nevezik, és könnyen és gyorsan kimutatható. Az orvostudományban a reakció két módja létezik, amelyek alapvetően különböznek egymástól:
- a kvalitatív módszer feltárja egy adott vírus genetikai forrásának jelenlétét a biológiai anyagban;
- a kvantitatív elemzés a genetikai anyag számát méri, amely lehetővé teszi a patológia stádiumának meghatározását vagy a terápiás kurzus hatékonyságának értékelését;
- A genotípus meghatározza a szervezetben jelenlévő vírus típusát.
Általában a vérvizsgálat segít azonosítani a virémia természetét és a kórokozó genetikai típusát. A kutatást általában a diagnosztikai rendszer érzékenységének mértékétől függően 1 alkalommal végezzük. Szükség esetén ismételt vizsgálatot végzünk ultrahangos reagenssel.
Kiváló minőségű PCR
Mi a magas minőségű PCR RNS hepatitis C-re? A reakció lényege a hepatitis RNS-szekvencia jelenléte, és a reakció csak hasonló etimológiájú virális fehérjék jelenlétében lehetséges az ELISA-ban. Az összehasonlítás során a terhelés és a májterület esetleges károsodása észlelhető.
E módszer megkülönböztető jellemzője, hogy képes egy különálló gén jelenlétét kimutatni.
Meg kell jegyezni, hogy a PCR és az ELISA vizsgálatok eredményeinek kézhezvétele után a beteg megfelelő kezelést igényel, függetlenül attól, hogy mi a végső immunvizsgálati eredmény. A pozitív fertőzés jelzi, és a PCR negatív a vírusrészecskék számának csökkenését jelzi az érzékenység szintjéhez képest.
A negatív PCR és az ELISA előállítására számos feltétel áll fenn:
- a megfelelő anyaggyűjtési feltételek hiánya;
- a kapott elemzés szennyeződést tartalmaz;
- heparin korai injekciója esetén.
A páciensnek nem kell bizonyos szabályokat követnie a vérmintavételhez a PCR elemzéshez, ebben az esetben az elemzés minősége attól függ, hogy az orvosi szakember végez-e. A betegség jelenlétének megállapítása (különösen az akut formában) a fertőzés utáni néhány héten belül jelentkezik.
Kvantitatív elemzés
A további terápia kialakulása és a test reakciója előtt a vírusterhelés kimutatására kvantitatív vizsgálatot ajánlunk. A vérmintavétel folyamatát hasonló módon végzik, mint a kiváló minőségű PCR-rel és az ELISA-val, az egyetlen feltétel az, hogy nincs lehetőség arra, hogy a beteg a dohányzás előtt eljárjon.
Az adatok tanulmányozásából nyert jellemzők tekintetében a megnövekedett terhelést 800000 IU / ml, alacsony - 400000 NE / ml mutatók jellemzik. A vírus jelenlétét a páciens testében a hepatitis PCR jelzi, nem negatív minőségi vizsgálat.
Ez a fajta kutatás lehetővé teszi annak meghatározását, hogy mennyire veszélyes a beteg az őt körülvevő emberek számára. Például a magas szint azonosítása a beteg fokozott fertőzőképességét jelzi. Ezen túlmenően az elemzés eredményei segítenek a leghatékonyabb kezelés megfogalmazásában, és meghatározzák, hogy a meglévő terápia mennyire hatékony.
A tesztek gyors negatív reakciója a kiválasztott technika sikerét jelzi, a lassú pedig a módosítások szükségességét és a sokoldalú kezelés használatát jelzi.
Az elemzési eljárás lefolytatásának folyamata a betegség lefolyásának konkrét napjától függ. Az első meghatározást a beteg kórházi felvételét követő első napon végezzük el, majd az eljárást a gyógyszerek bevétele után 4, 12 és 24 héttel megismétlik.
Így a kvantitatív elemzés azt mutatja, hogy melyik kezelés a leghatékonyabb, a rendelkezésre álló terápia időtartama és a beteg veszélye más emberekhez viszonyítva.
genotipizáláshoz
Az anyagelemzés tanulmányozása során fontos meghatározni a vírus genotípus pontosságát. Jelenleg a hepatitis C vírus 11 fajtája létezik, amelyek viszont bizonyos alfajokat tartalmaznak.
Mindezek a fajok különböző módon reagálnak a különböző kezelésekre, az egyes fajták ellenállóak számos gyógyszerrel.
A genotípus lehetővé teszi a máj állapotának meghatározását és bemutatását. Nem ritka, hogy az eredményeket „nem írják be” az eredményekbe, ami azt jelenti, hogy a beteg vérében a vírust nem érzékeli ez a vizsgálati rendszer. Ez akkor észlelhető, ha egy adott genotípus nem felel meg ennek a zónának. Ilyen helyzetben az elemzés többször megtörténik, és egy érzékenyebb rendszert használnak az anyag tanulmányozására.
Ultra érzékeny módszer
Az ultrahangos módszer bizonyos esetekben szükséges, amikor a hepatitis diagnózisát más módszerekkel nem lehet elvégezni, ugyanakkor, amikor az elemzést a kezelőorvos határozza meg:
- ha gyanúja van a hepatitis C vírus jelenlétének a betegség rejtett változatosságával rendelkező betegekben;
- a hepatitis C vírus elleni antitestek jelenléte, amelyeket nem igazolt PCR diagnosztika;
- annak érdekében, hogy meghatározzuk a kiválasztott kezelési módszer hatékonyságának minőségét, és megerősítsük a betegség megszüntetését
Ennek a módszernek az érzékenysége jóval magasabb, mint az általánosan használt, azonban ez a módszer nem zárja ki a pozitív és negatív eredményeket. Ilyen esetben fontos az eljárás minőségének és magának az anyagnak a szennyeződésének lehetősége.
A PCR-elemzés magyarázata
Az elemzés dekódolása a bemutatott anyagok alapján történik, míg a laboratóriumi kutatási eredmények bizonyos, fentebb leírt adatokat tartalmaznak.
A transzkriptum tartalmazhat egy pozitív PCR-polimeráz-láncreakciót és egy negatív ELISA-t a vizsgálatban, ami azt jelenti, hogy a betegnek nincs hepatitisz C-jele a vérben, de a múltban a betegség akut formáját átadta. A diagnosztizáláskor a szakemberek általában PCR-teszt indikátorokat használnak.
Összefoglalva a fentieket, arra a következtetésre juthatunk, hogy az elemzés során fontos betartani az összes szabályt és ajánlást, hogy a kapott eredmények a lehető legpontosabbak legyenek, és a kapott adatok alapján meg lehessen határozni az alkalmazott terápia hatékonyságát és a teljes visszanyerés további esélyét.
A hepatitis C minőségi vizsgálata
2017. március 8., 12:29 Szakértői cikkek: Nova Vladislavovna Izvchikova 0 10.547
A C-hepatitisz polimeráz láncreakciójának minőségi vizsgálata meghatározza a HCV jelenlétét vagy hiányát a szervezetben. Laboratóriumi körülmények között az RNS szerkezetét vizsgáljuk, amely magában foglalja a vírust. A C vírus kimutatása esetén szükséges a kezelés folyamata, mivel a máj elhanyagolt állapota súlyos következményekkel jár. Kiváló minőségű PCR-t hajtunk végre a visszanyerés után, hogy megerősítsük az antitestek hiányát. Kijelölt és rutinszerű ellenőrzés. A kórokozó alacsony koncentrációjában a vérben a PCR (kvalitatív) nem érzékel semmit, mert a diagnosztikai rendszer saját érzékenységi küszöbértékekkel rendelkezik. A betegség kezdeti stádiumában vagy enyhe formában a PCR-t ultradiagnosztika végzi ultraérzékeny berendezéseken.
Mi az RNS vírus?
A hepatitis C vírus (vagy a hepatitis C vírus RNS) RNS jelentése maga a májbetegség. A C vírus a test egészséges sejtjéhez kötődik belsejében. Idővel az egész testben elterjedt, csak a vérbe kell jutni. Ennek eredményeként a kórokozó behatol a májba, megolvad a sejtjeivel és keményen működik. A májsejtek (hepatociták) befolyása alatt vannak, változásokon mennek keresztül, és ebből meghalnak. Minél hosszabb a C vírus a májban, annál nagyobb a sejtek száma. Idővel veszélyes betegségek alakulnak ki, ami rosszindulatú degenerációhoz és halálhoz vezet.
A máj vírusfertőzése nem nyilvánulhat meg kívülről. A fertőzött személy sok éven át vagy évtizeden át teljesen egészségesnek érzi magát, és csak véletlenszerű vizsgálata leggyakrabban patológiát tár fel. A hepatitisz vére adásakor az RNS (ribonukleinsav) lánc egy részét, amely a humán gén (DNS) része, vizsgáljuk. A laboratóriumi vizsgálatok eredményeit nem szabad önkezelésre használni, mert ez csak egy mutató. A pontos képet és a további diagnózist az orvos határozza meg.
Amikor elkészült: a kutatásra vonatkozó jelzések
A HCV megerősítésekor PCR-analízist végzünk (polimeráz-láncreakció). A PCR-vizsgálatok segítenek megtalálni az RNS-struktúrában a kórokozót, és hatékony terápiát írnak elő. A következő esetekben kinevezték:
- a máj gyulladásának jeleinek kimutatása;
- szűrővizsgálatok megelőzésre;
- a kapcsolattartók vizsgálata;
- vegyes eredetű hepatitis diagnózisa (a fő kórokozó meghatározása);
- a vírus reprodukciós aktivitásának szintjének meghatározása krónikus formában;
- a máj cirrhosisa;
- meghatározza az előírt kezelés hatékonyságát.
A PCR kvalitatív és kvantitatív elemzése van. A mennyiségi PCR mutatja a vírus hordozóval rendelkező RNS százalékos arányát a vérben, és a kvalitatív a vírus jelenlétét vagy hiányát jelzi. A minőségi mutatónak (a C-hepatitis RNS jelenléte) szintén kvantitatív kutatásra van szükség. A hepatitis C okozta ágens magas koncentrációjának szintje a transzmisszió kockázata, vagyis mások fertőzése. Az alacsony számok jobban kezelhetők. A vérben lévő RNS-vírusok mennyisége nem kapcsolódik a betegség intenzitásához. Az interferon-terápia esetében a PCR-analízist is elvégezzük a kezelési ciklus időtartamának és összetettségének meghatározására.
A hepatitis C magas minőségű PCR-elemzésének jellemzői
Minőségi analízist kapunk egy olyan polimeráz láncreakció indikátorral, amely a vérben hepatitis C-vel szembeni antitestekkel rendelkezik. Javasolt a hepatitisz B tesztje, majd pozitív következtetés esetén és a hepatitis D esetében. A kvalitatívan elemzett reakciót más vérvizsgálatokkal együtt kell elvégezni. Az elemzések teljes képet fognak mutatni a vírus terjedéséről.
A vizsgálati eredményekből csak a hepatitis C pozitív vizsgálata lesz látható vagy negatív, azaz vírus jelenléte vagy hiánya. Ha a kimenet "észlelhető", akkor a vírus aktív és továbbra is aktív. A "nem észlelt" megjelölés a vírus hiányát vagy annak kis mennyiségét jelzi. Ezzel a mutatóval szem előtt kell tartani, hogy a diagnosztikai rendszerek analitikai érzékenysége eltérő, és hogy az RNS hepatitis C továbbra is a vérben lehet, de az elemzésben nem jelenik meg.
Egy különösen érzékeny PCR módszer kimutatja az ultra hepatitis C-t még gyenge mennyiségben is. Fluoreszcencia hibridizációs vizsgálatot alkalmaztunk, amely többszöröse a standard PCR rendszereknél. A módszert több esetben használják:
- a hepatitis C gyanús rejtett formái;
- A PCR-diagnosztika nem erősítette meg a kórokozót, de vannak antitestek;
- hasznosítás esetén;
- a korai fertőzés kimutatására.
Dekódolási elemzés
A HCV PCR dekódolása befolyásolja a végső döntést, különösen diagnosztizáláskor, különösen az ultrametod módszerrel. A vizsgálat fő hátránya, hogy a minta és az anyagok szigorú betartása a steril körülmények között történik. A kis eltérések néha pontatlan analitikus következtetéseket mutatnak, bonyolítják a diagnózist és az azt követő kezelést. A hepatitis RNS meghatározására vonatkozó PCR elemzése nem mindig biztosan mutatja a betegség képét, néha pontatlanságok megengedettek, és mindkét irányban.
A hepatitis vírus diagnosztizálása ajánlott átfogó vizsgálatot végezni.
A mutatók normája
A polimeráz láncreakció analízisében a vizsgálat eredményei között a JgM antitestek vírusos hepatitisz C elleni hiánya tekinthető. Ugyanakkor a szerológiai analízis eredményei azt mutatják, hogy a C vírus elleni antitestek jelen vannak, és ez szintén a normál tartományon belül van. A kvalitatív meghatározás nem mutatja a betegség intenzitását, csak a C-hepatitisz okozta RNS-ben társul. Ezt az elemzést a kezelés után megismételjük, hogy megerősítsük a tényleges helyreállítást.
eltérések
Ha a HCV RNS elleni JgM antitestek jelen vannak, ez jelzi a fejlődő fertőzést. A betegség ugyanakkor akutan vagy krónikusan folytatódik, különböző szakaszokban nyilvánul meg. Ha az antitestek számának csökkenését rögzítik, az elemzés azt jelzi, hogy a kezelés eredményeit a gyógyulás során sikerült elérni. Rendkívül ritkán fordulnak elő hamis pozitív eredmények a diagnosztikában. Ezek a terhesség alatt és más fertőző betegségekben szenvedő nőknél fordulnak elő.
Diagnózis a hepatitis C PCR-sel
Nem mindenki tudja, miért használják a hepatitis C PCR diagnosztikai módszerét. A betegségek egyik leggyakoribb csoportja a gyomor-bélrendszer fertőző betegségei. A gyomor (fekélyek), a belek (colitis, enteritis) és a máj (hepatitis) leggyakrabban érintettek.
A fent felsorolt szervek közül a legnagyobb terheket a májra terhelik. A szervezetben a máj szerepe rendkívül fontos:
- Szinte minden anyagcsere-reakció a májban történik (ez az, ahol mindenfajta létfontosságú összetevőt képeznek, amelyek lehetővé teszik a szervezet teljes működését).
- A máj a fő méregtelenítő szerv. Segítségével (különösen az epe révén) sok szubsztrátumot távolítanak el, amelyek mérgezést okozhatnak, és súlyos következményekkel járhatnak.
Sajnos sokan nem figyelik az egészségüket, ezért a máj kezd szenvedni. A különböző etiológiák (vírusos, toxikus) hepatitise általában kialakul.
A hepatitis meghatározása
A vírusos hepatitis fontos helyet foglal el a májbetegségek között. A betegség lefolyásának súlyossága, a kezelés bonyolultsága elsődleges helyet foglal el a szerv másik természetének patológiája között.
Minden hepatitis akut és krónikus. Az A és B hepatitist akutnak nevezzük, a krónikus C-hepatitisz közül az első.
Ezt a betegséget a hepatitis C vírus okozza, melynek jellemzője, hogy a betegség sokáig tarthat klinikai megnyilvánulások nélkül.
Ez főleg a véren kerül átadásra. A vér áramlásával a vírus belép a májba, ahol a sejtekben szaporodik. A virion felhalmozódása következtében a fertőzött hepatocita megsemmisül. Erre válaszul antitestek kezdődnek, amelyek a hepatociták maradványait támadják meg. Emiatt idővel kialakul a májsejtek elleni medence, ami súlyosbítja a betegség lefolyását.
Mivel a betegség enyhe tünetmentes vagy tünetmentes, és a klinikai tünetek csak akkor jelennek meg, ha a sejtek jelentősen érintettek, ez a betegség diagnosztikai módszerek létrehozását teszi szükségessé annak jelenlétének kimutatására és megfelelő intézkedések megtételére.
A hepatitis C diagnózisa: kvalitatív és mennyiségi elemzések
Jelenleg a hepatitis C diagnosztizálásához olyan módszereket alkalmazunk, mint a májbiopszia és az immunogram.
Ezek lehetővé teszik, hogy közvetlenül meghatározzuk a fertőzött hepatociták (májbiopsziás minták) vagy az érintett sejtek elleni specifikus antitestek (immunogram) jelenlétét. Van azonban olyan módszer, amely lehetővé teszi a vírus jelenlétének megbízható meghatározását. Ez PCR - polimeráz láncreakció.
Ennek a módszernek a lényege abban rejlik, hogy bizonyos körülmények között előfordul az RNS-láncok termelése. Ez annak a ténynek köszönhető, hogy a szóban forgó vérben vagy biopsziában van egy vírusrészecske fragmense. A tápközeg egyes molekuláival való összekapcsolásakor a vírus RNS-re komplementer láncok szintézise történik. A hepatitis C vírus ismert nukleotidszekvenciájával végzett későbbi elemzésükben és összehasonlításukban megállapítható, hogy a vírus jelen van-e a szervezetben, és hogy a májkárosodás van-e.
A PCR-t a hepatitis vírus elleni specifikus ellenanyagok kimutatása után végezzük. A teszt elvégzése után az eredmény - az RNS „kimutatható” vagy „nem észlelhető”. Alkalmanként „nem elegendő anyagot” mondhat - ebben az esetben a hepatitis C ismételt vizsgálata szükséges.
Ha a vírusrészecskék száma kisebb, mint a szükséges minimális mennyiség, akkor azt mondhatjuk, hogy nincs hepatitis, és a genetikai anyag minimális mennyisége „összetéveszthető” a genetikai anyag, vagy néhány, a vírussal egybeeső nukleotidszekvencia után.
- A PCR esetén negatív eredmény figyelhető meg, ha a vérben valóban vírusrészecskék vannak, de olyan kicsi (a közelmúltban bekövetkezett fertőzés vagy az elemzés előzte meg a hosszú távú és intenzív vírusellenes terápiát), hogy a tesztrendszer egyszerűen nem tudta normálisan meghatározni koncentrációjukat. RNS - "nem észlelhető".
- Ha a PCR pozitív eredményt mutat, akkor annyi vírusrészecskék vannak a vérben, hogy azok száma meghaladja a vizsgálati rendszer alacsonyabb érzékenységi küszöbét. Ebben az esetben magas a fertőző folyamat kialakulásának kockázata (vagy már meglehetősen előrehaladott állapotban van). Általában a nagy mennyiségű vírus már a kezelés és az azt követő májtranszplantáció jelzése.
Néha egy teszt hamis pozitív vagy hamis negatív lehet.
A hepatitis hamis negatív PCR-eredményét figyelték meg abban az esetben, ha bizonyos komponensek jelen vannak a reakcióközegben, amely gátolja a vírusrészecskék képződését. Emiatt nem lehet valós képet kapni a vér állapotáról, amely hozzájárul a vírus áthaladásához és a betegség előrehaladásához. A heparin jelenléte a vérben szintén befolyásolhatja a reakciót (a vér relatív viszkozitásának csökkentésével). Az elemzés helytelen értelmezése akkor is lehetséges, ha a vizsgált anyag szállításának és tárolásának feltételei nem teljesültek.
Hamis pozitív eredmények, amikor a C-hepatitisz diagnosztizálódik, a PCR leggyakrabban akkor következik be, amikor a cső vagy a munkakörnyezet szennyezett. Ezenkívül pozitív eredményeket lehet megfigyelni más csoportok hepatitis vírusainak jelenlétével (keresztreakció miatt).
A hepatitis C kimutatására szolgáló PCR kvalitatív elemzése
A nagyszámú krioglobulin jelenléte a vérben szintén közvetlenül befolyásolja a PCR lefolyását. Emiatt elengedhetetlen, hogy a hepatitis C vizsgálata előtt meg lehessen határozni a vérben lévő koncentrációjukat annak érdekében, hogy előzetesen kimutassák az eredményt és megakadályozzák azt.
E vizsgálatok után világossá válik, hogy vannak-e vírusos részecskék a vérben. Ezek meghatározásakor ajánlatos az antivirális terápia azonnal megkezdeni, hogy lassítsák a folyamat progresszióját. A hepatitis B-szel ellentétben nincs teljes gyógyulás a C-hepatitisben; a betegség csak a látens stádiumba megy, és lassabban indul el. A májkárosodás elkerülhetetlen. A folyamat utolsó szakaszában, amikor a máj már nem képes megbirkózni a funkciójával, megkövetelheti a transzplantációt.
A kezelést főleg két gyógyszerrel - interferonnal és ribavirinnel - végzik.
A hepatociták legyőzésének folyamatának lassításában bizonyították hatékonyságukat. Az út mentén az infúziós terápia feltétlenül szükséges a máj munkájának megkönnyítésére.
Minden olyan beteg, aki a vírusrészecskék számának növekedését látta a vérben, szükségszerűen egy hepatológusnál regisztrálható. Évente többször ajánlatos megelőző vizsgálatot végezni, hogy meghatározzák a folyamat előrehaladását és a transzplantációra vonatkozó jelzések időben történő felismerését. Emellett hepatoprotektorok is használhatók, bár az orvosok véleménye kissé eltér. Egyesek úgy vélik, hogy ezek a gyógyszerek lehetővé teszik, hogy felfüggessze a folyamatot, és megvédje a még érintetlen hepatocitákat; mások meg vannak győződve arról, hogy nincs értelme őket venni, és intenzív vírusellenes terápiát kell végezni.
Így a C-hepatitis a betegségek kategóriájába tartozik, amelynek azonosítása bizonyos nehézségekkel jár. A diagnosztikai módszerek javítása, valamint az időben történő megelőző vizsgálatok csökkentik a betegség előfordulását. Fontos a betegség megelőzése is. Gondosan el kell kerülni a vérrel való érintkezést, el kell utasítania a kábítószer-fogyasztást, csak ezután megszűnik ez a betegség. A megelőzés és a kezelés fő célja a beteg tudatos hozzáállása az egészségükre.
A hepatitis C-hez PCR-elemzés és az eredmények dekódolása
A hepatitis C PCR-elemzés olyan tanulmány, amelynek fő célja a kórokozó genetikai anyagának azonosítása. Az elemzés feltárja a betegség okozóját a polimeráz láncreakció alkalmazásával. Ez a diagnózis nagy pontosságú, specifikus a vírusfertőzés hiányának vagy jelenlétének kimutatására.
A diagnózis lényege
A hepatitis C vírusnak a páciensből történő meghatározásához szükséges PCR-analízis elvégzéséhez vénás vért veszünk, amely potenciálisan tartalmazza a kívánt vírus RNS (ribonukleinsav) HCV-jét.
A C-hepatitis PCR-vizsgálata egy eljárást jelent a beteg vérrészecskéihez való hozzáadásához:
- primerek (a szükséges gén rövid mesterségesen szintetizált régiói);
- speciális enzim (RNS-polimeráz).
A mintavétel után a biológiai anyagot a laboratóriumba küldik. A közvetlen PCR-analízishez egy adag vér szükséges, a második vizsgálatot ELISA-val küldjük. Az enzim rövid idő alatt képes növelni a kórokozó vírusának genetikai anyagának számát. Egy speciális berendezésben több hő- és hűtési folyamatot hajtanak végre. A végső szakaszban a kapott anyagot összehasonlítjuk a vírus génjeivel, és következtetést vonunk le a patológia jelenlétéről vagy hiányáról a beteg testében.
A PCR-analízis lényege és elvégzése a laboratóriumban. A szibériai filmet forgatta.
A kutatás típusai
Háromféle diagnosztika létezik, amelyek lehetővé teszik a hepatitis C vírus jelenlétének meghatározását az emberi szervezetben:
- genotipizáláshoz;
- minősége;
- kvantitatív.
Minőségi módszer
A hepatitis C diagnosztikája kvalitatív módszerrel alkalmazható olyan betegek esetében, akiknél a vérvizsgálat során a vírus elleni antitesteket észlelik. A HCV RNS akut fázisának jelenléte esetén az ilyen diagnosztikai intézkedések a fertőzés után 1-2 héten belül meghatározhatják a betegség jelenlétét. Ebben az időszakban a C-hepatitis elleni antitestek még nem alakulhatnak ki.
Kvantitatív módszer
Kvantitatív diagnosztikai módszert alkalmaznak a vírus koncentrációjának meghatározására a vérmintákban. A virémia (koncentráció fok) ilyen vizsgálata lehetővé teszi a vírusos RNS egységek számának pontos meghatározását. A végeredmény a megfelelő térfogatban van kifejezve. Ha kvantitatív elemzésről beszélünk, akkor a mutatókat 1 ml-ben mérjük (1 köbméter).
A vírusterhelési paraméter a betegség fertőzőképességének szintjét jelenti, azaz a beteg fertőzőképességének mértékét tükrözi. A gyakorlatban ez azt jelenti, hogy minél nagyobb a vírus koncentrációja a vérben, annál nagyobb a valószínűsége annak, hogy a páciens hepatitis C-vel megfertőzze másokat. A kvantitatív kutatási módszer lehetővé teszi a kezelés minőségének és hatékonyságának megállapítását is.
genotipizáláshoz
A genotipizálás feltárja a betegség okozójának mutációit. A kezelési terv megadása előtt meg kell határozni a vírus genotípust: a kezelés minősége és időtartama függ attól. Például az I-típusú betegség kezelésében a hatékonyság 60%, a II, III típusú - körülbelül 80%.
A hepatitis PCR elemzés előnyei
Az eljárás fő előnyei a következők:
- A korai diagnózis lehetősége. A PCR-analízis képes kimutatni a vírus jelenlétét a fertőzés korai szakaszában.
- Alacsony hiba eredménye. A vizsgált biológiai erőforrás lehetővé teszi, hogy diagnosztizálja a genetikai anyag egy szakaszát, amely csak egy típusú vírusfertőzésre jellemző. Ez a körülmény lehetővé teszi a hamis diagnosztikai eredmények megelőzését.
- Nagyfokú érzékenység. A PCR-analízis képes kimutatni a vírus RNS-ét kis mennyiségben, ami lehetővé teszi a látens fertőzések időben történő nyomon követését.
Jelzések
Szükség van a C-hepatitisz PCR vizsgálatára, ha rendelkezésre áll:
- a betegekkel való érintkezés, amely fertőzéshez vezethet;
- a májcirrózis tünetei (a lép kiterjedése, a máj méretének nem jellemző változása, a vénás vénás plexus kimutatása a bőr alatt);
- az ELISA pozitív eredményei;
- az AST és ALT fokozott aktivitása (a vér biokémiai elemzésében nyilvánul meg);
- a vírusellenes kezelés irányításának szükségessége;
- a vírusterhelés kialakításának szükségességének kezdeti szakaszában;
- a terápia utolsó szakaszának végrehajtása a lehetséges ismétlődések kizárására;
- a betegnek hepatitis B-je van, hogy kizárja a vegyes májkárosodás kialakulását.
Hogyan lehet felkészülni a véradásra a PCR-kutatáshoz
A PCR-elemzés előkészítése a következő ajánlásokat tartalmazza:
- vér veszik reggel;
- az elemzést üres gyomorban végzik, ezért célszerű szünetet tartani az utolsó 8-10 órás táplálékfelvétel között;
- néhány nappal a diagnózis előtt ki kell zárni a zsíros, fűszeres és sült ételeket, az alkoholtartalmú italokat és a dohányzást;
- egy nappal az elemzés előtt tartózkodni kell a nehéz fizikai terheléstől, kizárni az osztályokat az edzőteremben vagy a medencében.
Elemzési eredmények: normák és eltérések
Az elemzés önmagában nem hosszú távú, és a magasan képzett speciális hepatológus vagy fertőző betegség szakértő dekódolja a hepatitis C PCR eredményeit. Az elemzés eredményei alapján a beteg diagnosztizálódik.
A felmérés eredményeinek helyes megfejtése érdekében a következő mutatókat veszik figyelembe:
- a vér biokémiai elemzése;
- ultrahang adatok;
- biopsziás eredmények.
A mennyiségi elemzés értelmezése
A PCR mennyiségi elemzés eredményeinek megszerzése során a következő mutatókat veszik figyelembe:
PCR módszer hepatitis C kimutatására
A PCR egy polimeráz láncreakció, amely a hepatitis C jelenlétének meghatározására szolgál a szérumban, és az eredmény pozitív és negatív.
A PCR módszer előnyei
Ez a diagnosztikai módszer az alábbi előnyökkel rendelkezik:
- A PCR módszer lehetővé teszi a következő eredmények meghatározását:
- egy RNS-vírus jelenléte;
- a sugárzás mértéke;
- eredeti genetikai információ;
- a genetikai adatok egyedisége és egyedisége.
- Használhatja a szükséges klinikai anyagokat:
- vér;
- plazma;
- vizelet;
- testnedvek és ürülék;
- köpet és mások.
- Lehetővé teszi, hogy egynél több mikroorganizmus egyidejűleg meghatározza a vérben, ellentétben más mintákkal.
- Az eredmények 24 órán belül.
- Az elemzés és a kórokozók tárolására és szállítására szolgáló egyszerűsített módszereket még halott környezetben is meghatározzák.
- A PCR egyedisége lehetővé teszi bizonyos mikroorganizmusok azonosítását, amelyek nem alkalmasak más mintára.
- A reagensek nagyfokú érzékenysége, a teszt a legpontosabb.
A PCR minőségi elemzésének jellemzői
Minőségi vizsgálatot végzünk, hogy meghatározzuk a vírus jelenlétét a vérben és negatív vagy pozitív eredményt kapjunk.
Az ilyen típusú diagnózis indikációja a C-hepatitis elleni antitestek kimutatása a beteg testében.
Lehetséges eredmények:
- észlelt (pozitív);
- nem észlelhető (negatív).
A minőségi teszt nem alkalmas olyan betegek számára, akiknek a vérében nagyon alacsony a vírusmennyiség, ezért bizonyos érzékenységű.
Az "észlelt" eredmény
A C-hepatitis vírus kimutatása néhány héttel a test fertőzése után is lehet, még akkor is, ha a kórokozóval szembeni ellenanyagok nincsenek. Ez az eredmény a hepatitis C-re jellemző RNS fragmensének a szervezetben és a vércsoportban való jelenlétét jelzi.
A pácienst a vírussal fertőzöttnek tartják, és a kórokozó sejtek tovább terjednek a szervezetben.
"Nem észlelt" eredmény
Ez az opció azt sugallja, hogy a vizsgált biológiai anyag mintájában nincsenek hepatitis C-re specifikus RNS-fragmensek. Ez negatív eredmény.
A teszt érzékenysége nem tárja fel az RNS-fragmensek alacsony tartalmát, így a „nem észlelt” eredmény nem mindig valószínű.
Az eredmények értelmezésének jellemzői
Az eredmények értelmezésének fő jellemzője a PCR módszer küszöbérzékenysége.
Ez a következő mutatóktól függ:
- a vizsgálat pontossága;
- az alkalmazott berendezések típusa és minősége.
Megjegyezzük, hogy az érzékenység 10-500 IU / ml között változhat. Ebből következik, hogy ha egy vírus 10 IU / ml-nél kisebb koncentrációban van jelen a vizsgált beteg testében, akkor a vizsgálat a „nem észlelt” eredményt mutatja. Ez azonban nem jelenti azt, hogy a kórokozó teljesen hiányzik.
A diagnosztikai rendszerek változatai
Jelenleg a diagnosztikai rendszerek számára a következő lehetőségek állnak rendelkezésre:
- Ha a vírust vírusellenes kezelésben részesülő betegből vettük, legalább 50 NE / ml érzékenységű diagnosztikai rendszereket kell alkalmazni. Erre a célra a következő analizátorokat használják:
- Cobas Ampicolor HCV-teszt;
- RealBest HCV RNS.
- A "hepatitis C" végleges diagnózisához három különböző biológiai anyagmintában kell kimutatni az RNS-vírust. Ezeket az ajánlásokat az Egészségügyi Világszervezet dolgozza ki. Ha az eredmény háromszor negatív, a diagnózist nem erősítik meg.
- Abban a pillanatban, a PCR-módszeren kívül pontosabb teszt is létezik, amit TMA-nak (transzkripciós amplifikációs módszer) hívnak. Az érzékenység küszöbértéke sokkal magasabb, mint más diagnosztikai módszereknél.
Az észlelt vírusmódosítások tartománya
A genetikai fejlődés ebben a szakaszában számos vírusmódosítás és -változat ismert.
A laboratóriumi diagnosztika országunkban abszolút pontossággal meghatározhatja a következő genotípusokat:
A PCR kvantitatív elemzés jellemzői
A mennyiségi elemzés a hepatitis C vírus definíciója az emberi szervezetben. A vizsgálat során a kiindulási anyagban az RNS-t és a vírusterhelést PCR-rel határozzuk meg. Ellenkező esetben azt mondhatjuk, hogy a teszt lehetővé teszi, hogy azonosítsuk, hány vírussejt van egy biológiai folyadékban. Az ilyen típusú vizsgálathoz csak vénás vért használnak. Nincs specifikus vizsgálati készítmény.
A mennyiségi elemzés lehetővé teszi, hogy a már megkezdett kezelési szakaszban figyelemmel kísérje és értékelje annak hatékonyságát. Az értékeléshez a vizsgálati adatokat a terápiás beavatkozások előtt és alatt végzik. A kapott eredmények segítségével megjósolható a betegség lefolyása.
A választott kezelési módszer 3 hónap elteltével történő sikerességével az RNS mennyiségének többször kell csökkentenie. Az ajánlások szerint a mennyiségi elemzést egy, majd három és hat hónap elteltével végezzük. A kezelés eredményének utolsó eredménye negatív.
A mennyiségi PCR-teszt eredményeinek értékelése
Hazánkban két lehetséges lehetőség van a mennyiségi PCR-teszt eredményének értékelésére:
- a biológiai folyadék milliliterére jutó másolatok száma;
- a nemzetközi egységek száma milliliterenként.
A nemzetközi egységek megszerzéséhez a példányszámot 4-gyel osztjuk.
- magas, 800 000 NE / ml PCR-rel;
- alacsony a 400 000 NE / ml alatti PCR-érték.
A mennyiségi vizsgálat eredménye 2 lehetőséget kínál:
- "A mérési tartomány alatt";
- "Nem észlelt" (negatív).
Értékelés: „a mérési tartomány alatt”
Ez a következtetés akkor következik be, ha a kvantitatív RNS-teszt nem tárta fel a C-hepatitisz okozta kórokozót a sejt forrásanyagában, de a vírus még mindig jelen van a vérben. Az elemzés megbízhatóságát a kvalitatív módszer is megerősíti, mivel a kvantitatív vizsgálat érzékenységi küszöbértéke nem érzékelheti a kórokozó kis értékeit és koncentrációit.
Értékelés: "nincs észlelve"
Ez a következtetés akkor következik be, ha a C-hepatitis RNS-vírusait a diagnosztika során nem találták meg a forrásanyagban, ami negatív eredmény.
A mennyiségi PCR-vizsgálat elemzésének eredményeinek értelmezése
A vírusterhelés mutatójának használata határozza meg:
- a betegség elhanyagolásának mértéke;
- mennyire fertőző a beteg;
- antivirális terápia hatékonyságát.
Minél magasabb a hepatitis C vírus a szervezetben, annál veszélyesebb a beteg más embereknek és annál progresszívebb a betegsége.
A hepatitis C PCR fontos diagnosztikai módszer, különösen a terápiás beavatkozások során. A kapott negatív vagy pozitív eredményeknek köszönhetően lehetőség van a hatékonyságuk értékelésére, a beteg teljesen gyógyítására vagy a kezelési idő lerövidítésére.
A hepatitis C PCR-analízise
A "krónikus vírusos hepatitis C (CVHS)" diagnózisához a személy átfogó vizsgálata szükséges, amely magában foglalja a klinikai, laboratóriumi és műszeres tanulmányokat. A diagnózis szempontjából fontos a helyes diagnózis szempontjából a PCR módszer - polimeráz láncreakció.
Mit mutat ez az elemzés és miért van szükség rá?
Ez a laboratóriumi módszer kimutatja a hepatitis C vírus RNS-jét az emberi vérben. A vírus ellenanyagok elleni enzimhez kötött immunoszorbens vizsgálattal (ELISA) együtt a PCR-t használják a CVHC és a kórokozó genotípusának diagnosztizálására. Ez a kutatás a laboratóriumi diagnosztika egyik legújabb módszere. Megbízhatósága a CVHS-nél meghaladja a 97% -ot, ami a kutatás szempontjából nagyon jó mutatónak tekinthető.
Három PCR vérvizsgálatot végeznek a CVHS-hez: kvalitatív, kvantitatív és vírus genotipizálás. A vírus első vizsgálata (kvalitatív elemzése) azt észleli a vérben, ezért csak diagnózis céljára használják fel.
A második (kvantitatív) vizsgálat megállapítja, hogy a vírusterhelés milyen mértékű a testre, ezért a terápia hatékonyságának ellenőrzésére használják.
A harmadik PCR (genotípus) tisztázza a vírus genotípusának megállapítását, ami nagyon fontos a helyes antivirális kezelés kijelöléséhez.
A polimeráz láncreakció technikájának lényege az enzimek alkalmazása, amelyek a biológiai anyagban szaporítják a kórokozó genetikai anyagát. Az ilyen replikáció során a csövet a vérrel többször melegítjük és az enzimatikus reakció felgyorsításához szükséges hőmérsékletre hűtjük. Ezeknek a manipulációknak köszönhetően a vírus genom mennyisége sokszor megnő, lehetővé téve, hogy még minimális mennyiségben is kimutatható legyen.
A PCR diagnosztikának számos előnye van a többi laboratóriumi vizsgálathoz képest:
- nagy érzékenység - 97-98%;
- garantált analitikai specifitás (pontosan megmutatja a keresni kívánt kórokozót, és nem a kapcsolódó törzset);
- a vezetés sebessége (a következtetés meghozatala nem több, mint 2 nap).
Háromféle PCR-vizsgálat
Kiváló minőségű PCR-analízist rendelünk minden olyan beteghez, akiknél az ELISA-analízis kimutatott antitesteket a HVGS-vírus ellen. Kiváló minőségű PCR végrehajtása után két válasz opció érhető el: "Az RNS detektálva" vagy az "RNS nem észlelhető". A vírus minimális mennyiségének a vérben történő kimutatásához legalább 50 IU / ml érzékenységű vizsgálati rendszerekre van szükség. Ha a vírus koncentrációja a beteg vérében kisebb, mint a diagnosztika meghatározása, a vizsgálat eredménye hamis negatív lehet. Az ilyen diagnosztikai hiba elkerülése érdekében a PCR diagnosztikát végző laboratóriumoknak nagyon érzékeny vizsgálati rendszerekkel kell rendelkezniük. Az "Invitro" laboratóriumban például 15 IU / ml érzékenységű vizsgálatokat alkalmaznak. A laboratóriumi dolgozók kötelesek tájékoztatást adni a tesztek érzékenységéről a betegeknek és az orvosoknak az első kérésük alapján.
A PCR kvantitatív elemzése határozza meg a virémia mértékét, azaz a kórokozó koncentrációját a vérben, vírusterhelést. Ennek a vizsgálatnak a eredménye, a magas minőségű PCR-sel ellentétben, számokban, például 2 × 10 * 6 IU / ml, ami 2 millió nemzetközi egységet jelent 1 ml vérben. Néhány laboratórium egy másik indikátort használ - a példányszám / ml. Ez a két mutató könnyen konvertálható: 1 nemzetközi egység egyenlő 4 RNS-példányban. Tehát 2 × 10 * 6 IU / ml azt jelenti, hogy a vírus RNS 8 × 10 * 6 példánya 1 ml-ben, azaz a vékonyréteg-kromatográfiás eljárással. 8 millió példányban 1 ml vérben.
A genotípus meghatározása a vírus hat genotípusának egyikét jelenti. A klinikai kép, a máj szövődményeinek alakulása és a beteg jövőbeli prognózisa függ a kórokozó genotípusától. A vírus genotípusa nagyon fontos a diagnózis szakaszában, mivel a gyógyszerek kombinációja és a terápiás kurzus időtartama a betegnek a helyes meghatározásától függ.
Azonban ez a látszólag „tökéletes” laboratóriumi kutatásnak is van hátránya:
- a vizsgálat megismétli az összes kórokozó genetikai anyagát, még a nem élő is, ami torzíthatja az eredményt. Ezért a hatékonyság ellenőrzéséhez a PCR segítségével az újra-analízist legkorábban az előzőtől számított 2 hónappal végezzük el, hogy a halott vírusok „elhagyhassák” a beteg szervezetét;
- a vírusgenom egy része, amelyet tesztrendszerek segítségével határoznak meg, elméletileg más vírusokban vagy mikroorganizmusokban is jelen lehet, így hamis pozitív válasz lehetséges;
- vírusok gyorsan mutálnak. Néha a vírusmutáció sebessége és mértéke olyan magas, hogy a vizsgálati rendszer leállítja a genomjuk fogását. Ennek eredményeképpen hamis negatív eredmény érhető el.
Ezeknek a hiányosságoknak a kiegyenlítése érdekében a PCR diagnosztikai laboratóriumi vizsgálati rendszerek gyártói folyamatosan végeznek vizsgálatokat, beleértve a keresztreakciókat és a vírus adott genotípusával szembeni érzékenységet.
Hogyan kell a C-hepatitisz PCR-vizsgálatát elvégezni?
Annak érdekében, hogy a PCR vizsgálat megkötése megbízható legyen, szigorúan be kell tartani a magatartásra való felkészülés szabályait:
- a vizsgálatot üres gyomorban végzik (glükóz, zsírok, ásványi anyagok, amelyek az élelmiszerből a vérbe jutnak, befolyásolhatják az enzimreakció sebességét és minőségét);
- az utolsó étkezés és a vérmintavétel közötti különbség elemzéshez legalább 8 óra legyen;
- a tanulmány előestéjén tilos alkoholt fogyasztani és zsíros ételeket fogyasztani, amelynek megszüntetési ideje hosszú;
- a laboratóriumba való belépés előtt egy nap el kell kerülnie az erős fizikai és érzelmi stresszt;
- addig, amíg a vérmintavétel idejét nem ajánljuk dohányozni.
A hamis következtetések elkerülése érdekében az állítólagos páciensnek egy kicsit korábban a laboratóriumba kell jönnie, mint a vér. 15-20 percet vesz igénybe, amikor egy személy elkapja a lélegzetét. Az adrenalin, amely egy gyors séta után jelen van a vérben, befolyásolhatja a vizsgálat eredményét.
Ha az elemzésre kerülő beteg gyógyszert szed, erről értesítenie kell az orvost. Lehetséges, hogy néhányat el kell utasítani egy ideig (ha lehetséges).
A hepatitis C PCR vizsgálatának eredménye
Az elemzést végző laboratórium laboratóriumi orvosának eredményeinek dekódolása. A dekódolás a normából származó eredmény eltérésének meghatározása. A mutatók arányát közvetlenül a vizsgálati rendszer gyártója határozza meg, amelyet a laboratórium diagnosztikai célra használ. Ezért nem meglepő, hogy egyes laboratóriumokban a vírusterhelést IU / ml-ben és másokban másolatokban / ml-ben határozzuk meg.
Miután megkapta a következtetést, szükség van arra, hogy helyesen értelmezze. A vizsgálat eredményeinek kezelését a C-hepatitisben szenvedő beteg kezelőorvosának kell elvégeznie. A beteg objektív, műszeres és laboratóriumi vizsgálata után az orvos megfelelő mennyiségű adatot szerezhet a kapott PCR-eredmények helyes értelmezéséhez.
A kvalitatív elemzés értékelése általában nem okoz nehézséget még a betegeknél sem. Az eredmény csak egy lehet: "észlelt" vagy "nem észlelt". Ebben az esetben a második a norma.
A mennyiségi elemzés mutatóit nehezebb értelmezni. Megmutatja a beteg vírusterhelésének mértékét. Még a hepatológusok körében sem állapítható meg konszenzus a kimutatott virémia kezelésére vonatkozóan. A legtöbb orvos hajlamos arra gondolni, hogy a 8 × 10 * 5 NE / ml-nél nagyobb terhelést kell figyelembe venni. Az 1 × 10 * 7 IU / ml-nél nagyobb terhelés nagyon magasnak tekinthető, míg az alacsony terhelés kisebb, mint 4 × 10 * 5 IU / ml.
A vírusterhelés mértéke a vírus virulenciáját (agresszivitását) jelzi: minél nagyobb a vér mennyisége, annál gyorsabban alakulhat ki a máj szövődménye. A magas vérkoncentráció egy terhes nő vérében növeli annak valószínűségét, hogy a magzatba behatol a hemato-placenta-gáton. A virémia hatással van a kezelés hatékonyságára is: alacsony számban a terápia hatékonysága magasabb, mint a magasaknál.
Annak érdekében, hogy biztosak legyünk a C-hepatitisz PCR-analízisének pontosságában, csak azoknak a laboratóriumoknak kell előnyben részesíteni, amelyek jól bizonyítottak. Az árpolitika ebben az esetben nem játszhat elsődleges szerepet.
C-hepatitis PCR vizsgálata: típusok, indikációk, transzkriptum
A vírusos hepatitis C egy súlyos betegség, amely májkárosodásban szenved. A betegek nyolcvan százaléka krónikus. A vírus a májsejtekben - hepatocitákban - szaporodik és halálát okozza. A halott szövetet a kötőszövet fókuszai váltják fel, a fibrosis kialakul.
Mivel a fibrosis kialakul, a máj nem tudja teljesíteni a funkcióit, a máj cirrhózisa kezdődik, ami komplikációi miatt veszélyes: a portál vénás rendszerben fellépő nyomás, a gastrointestinalis vérzés, a véralvadás károsodása, az agyi magok károsodása által okozott mentális változások.
A betegség oka a vírus által okozott fertőzés a Flaviviridae családból, amely az RNS vírusok típusához tartozik. Ez azt jelenti, hogy a genetikai anyag, amellyel a patogén fehérjéi szintetizálódnak, a ribonukleinsavmolekulában van kódolva. A fertőzés véren, szexuálisan és egy terhes nőtől a magzatig terjed. Sajnos a fertőzés és az ellenanyag-termelés kezdete között elegendő idő állhat be - két hét és hat hónap között. Ez nem teszi lehetővé a fertőzés ELISA-val történő meghatározását és a kezelés kezdetét.
Mi a PCR-elemzés?
A PCR a molekuláris elemzés módszere, amely lehetővé teszi a patogén genetikai anyagának kimutatását a fertőzés utáni első héten a polimeráz láncreakció segítségével. A vizsgálat nagy specifitással, pontossággal rendelkezik, és nem csak a vírus jelenlétének vagy hiányának meghatározását teszi lehetővé, hanem annak koncentrációját és genotípusát is.
A vizsgálathoz a beteg vérét veszik fel, amelyben a vírus RNS potenciálisan megtalálható. A primereket hozzáadjuk a kis hosszúságú gén mesterségesen szintetizált szintjéhez, és az RNS polimeráz egy speciális enzim, amely többször megnöveli a kórokozó genetikai anyagának mennyiségét. Speciális berendezéssel több fűtési és hűtési ciklust hajtanak végre. Ezután az anyagot elemzik és összehasonlítják a vírus ismert génjeivel, amelyek alapján a fertőzés jelenlétéről vagy hiányáról következtetést levonnak.
A hepatitis C PCR-analízisének típusai
A PCR-elemzés három típusa létezik:
- A PCR kvalitatív elemzése. A tanulmány első szakasza. Ez lehetővé teszi a vírus genetikai anyagának azonosítását a vérben.
A PCR kvantitatív elemzése. Lehetővé teszi a vírus terhelésének meghatározását - a kórokozó genetikai anyagának egy milliliterben való koncentrációját. Ezt a vizsgálatot a kezelés megkezdése előtt végezzük, majd az első, negyedik, tizenkettedik és (ha a kurzus hosszú) huszonnegyedik hetes kezelését annak hatékonyságának értékelésére.
A hepatitis C PCR analízisére vonatkozó indikációk
A PCR-vizsgálatot az alábbi esetekben írják elő:
- érintkezés egy betegrel, amelynél fertőzés fordulhat elő;
- pozitív enzim immunoassay;
- a máj cirrhosisának jelei: a máj méretének megváltozása, a megnagyobbodott lép, a bőr alatti vénás plexus megjelenése a hason;
- a májkárosodás tüneteinek megjelenése: a jobb hasi fájdalom, a bőr sárgulása;
- az ALT és az AST fokozott aktivitása a vér biokémiai analízisében;
- a kezelés megkezdése előtt a vírusterhelés meghatározására;
- az antivirális terápia hatékonyságának ellenőrzése;
- a kezelés után a visszaesés szabályozása;
- diagnosztizált hepatitis B jelenlétében, hogy kizárja a vegyes májkárosodást.
A hepatitis C-vel kapcsolatos PCR-vizsgálatok magyarázata
A hepatitis C-re vonatkozó PCR-analízis és enzim-immunoassay dekódolását hepatológus vagy fertőző betegség szakértőjének kell elvégeznie. A PCR eredményeinek elemzése szükséges a vér, a biopszia és az ultrahang biokémiai analízisével. Csak egy képzett orvos képes elemezni a kutatás eredményeit, és ezek alapján előírja a helyes kezelést.
A kvalitatív elemzés dekódolása.
Az elemzett biológiai anyagban megtalálható a kórokozó genetikai anyaga. A fertőzés megerősítette.
A fertőzés hiányzik, vagy a patogén RNS mennyisége az érzékenységi határ alatt van.
Kvantitatív elemzés dekódolása.
Normál arány az egészséges emberek számára. Ez azt jelenti, hogy a vizsgálati anyag nem tartalmaz C-hepatitis RNS-t, vagy annak koncentrációja a vizsgálat érzékenységi küszöbértéke alatt van.
Az RNS-koncentráció a mennyiségi tartomány alatt van. Ezeket az eredményeket nagyon óvatosan értelmezik, korrelálják az egyéb tanulmányok adataival, gyakran újra tanulmányozzák.
A vírusterhelés szintjét egy adott koncentrációnál alacsonynak tekintjük. Általában a vírus mennyiségének csökkenése azt jelenti, hogy a terápia sikeres.
Több mint 8 * 10 ^ 5 NE / ml
A vírusterhelés szintje egy adott koncentrációnál magasnak tekinthető.
Több mint 2,4 * 10 ^ 7 NE / ml
Az RNS mennyisége meghaladja a mennyiségi tartomány felső határát. Ebből az eredményből nem lehet következtetéseket levonni a vírusterhelés mértékéről. Általában ilyen esetekben a vizsgálatot egy vérminta hígításával megismételjük.
A genotípus dekódolása.
Egy adott genotípus RNS-je
A biológiai anyagban egy bizonyos genotípusú és altípusú hepatitis C vírust észleltek. Az eredmény római számokkal és latin betűkkel van kódolva, például - 1a, 2b. Összesen hét genotípus és hatvanhét altípus van, de Oroszországban csak három első típus létezik.
A Hepatitis C vírus RNS kimutatható
Az RNS-t egy ritka genotípus vérében találták meg Oroszország számára, amely nem tulajdonítható az első, második vagy harmadik típusnak. Több kutatásra van szükség.
Ez az eredmény azt jelzi, hogy a beteg egészséges, vagy hogy a kórokozó RNS mennyisége túl kicsi.
Lehetséges, hogy a C-hepatitis PCR-analízise negatív, és az enzimhez kötött immunoszorbens vizsgálat felismeri a vírus elleni antitesteket. Ez azt jelenti, hogy a betegnek akut hepatitisz C-je volt, és önmagában gyógyult. Körülbelül húsz fertőzéses eset spontán helyreállítást eredményez, ha a beteg teste megfelelő ellenállással rendelkezik a fertőzéssel szemben.
Bár a PCR nagyon pontos, eredményei torzulhatnak az alábbi helyzetekben:
- a vért nem megfelelő körülmények között szállították a laboratóriumba, a hőmérsékletet megsértették;
- a biológiai anyagminta szennyezett;
- a vérben heparin és más antikoaguláns maradványai voltak;
- A kutatók gátlók voltak - olyan anyagok, amelyek lassítják vagy megállítják a polimeráz láncreakciót.
A PCR előnyei más módszerekkel szemben
- Diagnózis a korai szakaszban. A PCR kimutatja a kórokozó genetikai anyagát. Immunfluoreszcens analízis alkalmazásával csak immunoglobulinokat lehet azonosítani - olyan anyagokat, amelyeket a szervezet a fertőzésre adott válaszként termel. A hepatitis C fertőzés esetében a fertőzés és az immunválasz kezdete között eltelt különbség több hét és hónap lehet, ebben az időben az ELISA hatástalan lesz. A PCR választ ad a fertőzés utáni első héten.
Alacsony hiba valószínűsége. A vizsgált anyagban meghatározzuk a genetikai anyag területét, amely csak egy típusú kórokozókra jellemző. Ez kiküszöböli a hamis eredményeket. Amikor ELISA-hibák jelentkeznek, mivel az azonos típusú antitestek különböző vírusokkal szabadulhatnak fel - az ilyen antitesteket kereszt-antitesteknek nevezik.
Hogyan lehet felkészülni a véradásra a PCR-kutatáshoz
A hepatitis C PCR-analíziséhez vénás vért gyűjtünk. Általában a vérből két adagot veszünk a beteg vénájából: az első PCR-re és a második ELISA-val történik. Ez azért történik, hogy pontosabban értékeljük, hogy a beteg mennyire fertőzött egy vírussal, és hogyan küzd az immunitás.
Általában a betegnek az alábbi szabályokat kell követnie:
- vérvizsgálatot végeznek reggel;
- Az utolsó étkezés és a véradás közötti időszaknak nyolc-tíz órának kell lennie;
- két vagy három nappal az elemzés előtt el kell hagyni a sült és zsíros ételeket és az alkoholt;
- 24 órával az elemzés előtt a betegnek kerülnie kell a fizikai terhelést: ne hordjon súlyokat, ne menjen az edzőterembe vagy a medencébe.