Hepatitis B PCR

A korszerű hepatitisz B (HBV) gyógyszerek rendelkezésre állása egyértelmű indikációval rendelkezik a diagnózis pontos és gyors ellenőrzésére. Azonban a betegség első heteiben és a korlátozott immunvizsgálati módszerekben a szűkös klinikai adatok miatt a diagnózis sebessége csökken.

Az anti-HBc IgM, HBsAg, anti-HBc, HBeAg, anti-HBe markerek jelenléte lehetővé teszi a HBV megerősítését vagy egy korábbi betegség tényének megállapítását. De lehetséges, hogy meghatározzuk az aktív vírusrészecskék jelenlétét a vérben, és számozzuk ki a számukat a vizsgálat időpontjában a PCR-rel - kvantitatív valós idejű teszt a hepatitis B kimutatására. Az eljárás az ELISA diagnosztikai módszerekkel összehasonlítva megoldja a diagnosztikai problémákat, és lehetővé teszi a betegség lefolyásának előrejelzését a fogadás során vírusellenes gyógyszerek.

A betegség diagnózisának alapjai

A hepatitis B diagnózisa a klinikai megnyilvánulások, az enzim immunvizsgálat és a műszeres kutatási módszerek értékelésén alapul. A betegség az inkubációs időszakot követő akut fázisban jelentkezik, és a fertőzés dózisától és a kezelés hatékonyságától függően krónikus stádiumba lép. A kezelés fő célja, hogy megakadályozza a krónizációt, azaz a vírus részecskék eltávolítását a vérből. A betegség klinikai lefolyása a következő virémia nélkül gyógyul.

A fertőzés megszüntetésének tényét kvantitatív kutatási módszerrel kell igazolni.

Mivel minden kvalitatív enzim immunvizsgálat lehetővé teszi a HBV közvetett diagnosztizálását, azaz nem mutatja a kórokozó jelenlétét a test belső környezetében, de a fertőzésre adott immunválaszra jellemző, a terápia hatékonyságának ellenőrzése és a gyógyulás ténye nehezen bizonyítható. Ezért a hepatitis B-ben szenvedő betegnek vagy a diagnosztikai kritériumoknak a javára történő jelenlétét polimeráz-láncreakcióval kell elvégezni annak érdekében, hogy számszerűsítsük a vérben lévő vírusrészecskék számát. A diagnosztikai sebesség a fertőzés DNS-jének másolatainak hiánya.

A diagnosztikai módszer leírása

A hepatitis B PCR-diagnózisának igen érzékeny módszere a genetikailag módosított molekuláris biológiai vizsgálatok kategóriájába tartozik. Ezen keresztül a beteg biológiai anyagában lévő vírus DNS mennyisége és a megengedett arány határozza meg. A kapott eredmények alapján megállapítható, hogy a vírusrészecskék mennyisége egységnyi térfogatban van. A diagnosztikai vizsgálathoz használt anyag a beteg vénás vére. A chyle szérumnak a vizsgálat eredményére gyakorolt ​​lehetséges hatása miatt a bevitel kívánatos egy üres gyomorban.

A kapott eredményeket tovább kell adni az orvosnak a további taktikák értelmezéséhez és meghatározásához. A független dekódolás nem jelent diagnosztikai értéket.

A PCR módszerrel nyert vírusrészecskék számának eredményének jelentősége meghaladja az enzim immunoassays értékét. Mivel a valós idejű elemzés a betegség okozója jelenlétét mutatja a vérben, az információ tartalma magasabb, mint mások. Ha az ELISA csak az antitestek jelenlétét jelzi, amelyet az inkubációs időszak 4 hetében figyeltek meg, és több mint 8 héttel a vérből történő eltávolítást követően, akkor a polimeráz láncreakció egyértelműen megerősíti a betegség aktív lefolyását vagy gyógyítását, jellemzi az előírt terápia dinamikáját.

A polimeráz láncreakció a kórokozó részecskék kvantitatív meghatározásával megoldja a diagnosztikai kérdéseket a gyógyulás vagy a folytonos terápia miatt a kezelés abbahagyása érdekében, mivel nem hatékony. A módszer a HBV-vírus esetében a lehető leginkább specifikus, és elfogadható hibával rendelkezik.

Jelzések és teljesítménycélok

A hepatitis B kvantitatív elemzése a legmegbízhatóbb, és lehetővé teszi az ELISA módszerekkel kapott adatok megerősítését. A kinevezésre akkor kerül sor, ha:

  1. az ELISA pozitív diagnosztikai eredményének megszerzése;
  2. a vírus májkárosodásának megállapított diagnózisával rendelkező beteg kezelése;
  3. a hepatitis vegyes etiológiájának diagnózisában;
  4. ha szükséges, határozza meg a beteg vírusterhelését.

Mivel az enzim immunoassay módszert szélesebb körben alkalmazzák a fertőző betegségek szakemberének gyakorlatában, néhány enyhe betegségben szenvedő beteg kezelhető anélkül, hogy a vírusterhelést kell számolni. A PCR-t azonban általában a hepatológiai diagnosztika „arany standardjának” tekintik, mivel eredményének egyediségéből adódóan számos szervezeti problémát eltávolít. Ezért a beteg kvantitatív elemzésének iránya a következő célokat szolgálja:

  • adatgyűjtés a vírusrészecskék számáról a beteg vérében;
  • a hepatitis akut lefolyásának megerősítése és a krónikus betegségek időben történő ellenőrzése;
  • a látens vírushordozók állandó kimutatása pozitív ELISA-tesztekkel, virémia monitorozása;
  • a vírusellenes kezelés kijelöléséről, annak kombinációjáról és megszüntetéséről.

A HBV kimutatására szolgáló mennyiségi PCR-teszt alkalmazásának legfontosabb célja a kezelés lehetséges kombinációinak azonosítása. Magas vírusterhelés esetén az elemzés eredménye lehetővé teszi a szakember számára a gyógyszerek kombinációjának folytatását. A terápia során könnyen meghatározható az előírt farmakológiai kezelés hatékonysága a PCR eredménye alapján. Csak az immunvizsgálati módszerek adatai alapján lehetetlen időben meghatározni a kezelés tényét és aktuális hatékonyságát. Ezért a kvantitatív valós idejű vizsgálat szükséges elemzés az akut hepatitis, a magas virémiával és a krónikus HBV-vel rendelkező latens vírusfertőzés megkezdése előtt.

A mennyiségi PCR vizsgálati eredmények értelmezése

A kvantitatív PCR-teszt eredményeinek értelmezését a beteg kezelőorvosának kell elvégeznie. Szükséges a diagnosztikai indikátor értékelése és a terápiás taktika meghatározása.

A standard analizátor képes olyan mennyiségi indikátort előállítani, amely tükrözi a vizsgált vénás vérben jelen lévő vírus DNS példányszámát. Mérési egységek - másolatok / ml, NE / ml (másolatok milliliterenként, nemzetközi egységek milliliterenként). Az eredmények értelmezése a táblázatban a különböző mértékegységek jelzésével történik.

A hepatitis B vírus vizsgálata (ELISA és PCR) t

Hepatitis B vírus "s" antigén (HBsAg)

Hepatitis B felületi antigén a szérumban általában nincs jelen.
A hepatitis B felszíni antigén (HBsAg) kimutatása a szérumban megerősíti a hepatitis B vírus akut vagy krónikus fertőzését.

Akut betegség esetén a HBsAg-t a szérumban az inkubációs időszak utolsó 1-2 hetében és a klinikai időszak első 2-3 hetében észlelik. A HBsAg vérben történő keringtetése néhány napra korlátozható, ezért a betegek korai kezdeti vizsgálatára kell törekednie. Az ELISA módszer lehetővé teszi a HBsAg kimutatását a betegek több mint 90% -ában. A legérzékenyebb kutatási módszerek a betegek 5% -ában nem észlelik a HBsAg-t, ilyen esetekben a vírusos hepatitis B etiológiáját az anti-HBcAg JgM vagy PCR jelenléte igazolja.

A hepatitis B súlyosságának minden formája a hepatitis B súlyosságában a szérum HBsAg koncentrációjának jelentős mértékű ingadozása van, azonban van egy bizonyos minta: az akut időszakban fordított összefüggés van a szérum HBsAg koncentrációja és a betegség súlyossága között.

A HBsAg magas koncentrációja gyakrabban fordul elő a betegség enyhe és mérsékelt formáiban. Súlyos és rosszindulatú formákban a HBsAg koncentrációja a vérben gyakran alacsony, és a súlyos formában szenvedő betegek 20% -ánál és a vérben 30% -nál rosszindulatú antigénben nem észlelhető egyáltalán. A HBsAg elleni antitestekkel rendelkező betegeknél ez a háttér kedvezőtlen diagnosztikai jelnek tekinthető; a hepatitis B rosszindulatú formáiban határozzák meg.

A hepatitis B akut lefolyása során a HBsAg koncentrációja a vérben fokozatosan csökken az antigén teljes eltűnéséig. A HBsAg 3 hónapon belül eltűnik az akut fertőzés kezdetétől számított 3 hónapon belül.

A HBsAg koncentrációjának csökkenése több mint 50% -kal az akut periódus harmadik hetének végére általában a fertőzési folyamat szoros befejezését jelzi. Általában a betegség magas magasságában magas HBsAg-koncentrációjú betegeknél a vérben több hónapig észlelhető.
Az alacsony koncentrációjú HBsAg-ban szenvedő betegeknél sokkal korábban megszűnik (néha néhány nappal a betegség kialakulása után). Általában a HBsAg kimutatás ideje több naptól 4-5 hónapig terjed. A HBsAg kimutatásának maximális időtartama az akut hepatitis B sima lefolyásával nem haladja meg a betegség kezdetétől számított 6 hónapot.

A HBsAg-t általában egészséges emberekben találják meg profilaktikus vagy véletlen vizsgálatokban. Ilyen esetekben a vírus hepatitis B, anti-HBcAg JgM, anti-HBcAg JgG, anti HBeAg más markereit vizsgáljuk, és vizsgáljuk a májfunkciót.

Negatív eredmények esetén a HBsAg ismételt vizsgálata szükséges.
Ha a több mint 3 hónapos ismételt vérvizsgálatok HBsAg-t mutattak ki, ez a beteg vírusos hepatitis B krónikus betegnek minősül.
A HBsAg jelenléte meglehetősen gyakori. A világon több mint 300 millió fuvarozó van, és hazánkban mintegy 10 millió fuvarozó van.
A HBsAg cirkuláció megszüntetése a későbbi szerokonverzióval (anti-HBs kialakulása) mindig jelzi a szervezet gyógyulását.

A HBsAg jelenlétére vonatkozó vérvizsgálatot a következő célokra használják:

  • akut hepatitis B diagnózisára:
    • inkubációs időszak;
    • akut betegség;
    • korai helyreállítás;
  • a krónikus vírus hepatitis B diagnosztizálására;
  • betegségek esetén:
    • tartós krónikus hepatitis;
    • a máj cirrhosisa;
  • a kockázati csoportokban lévő betegek szűrésére és azonosítására:

  • gyakori hemotranszfúzióval rendelkező betegek;
  • krónikus veseelégtelenségben szenvedő betegek;
  • többszörös hemodialízisben szenvedő betegek;
  • immunhiányos állapotú betegek, beleértve az AIDS-et is.
  • A kutatási eredmények értékelése

    A vizsgálat eredményei kvalitatívan - pozitívak vagy negatívak. A negatív eredmény azt jelzi, hogy nincs szérum HBsAg. Pozitív eredmény - a HBsAg azonosítása az akut vírusos hepatitis B inkubációját vagy akut periódusát, valamint krónikus vírus hepatitisz B-jét jelzi.

    A hepatitis B vírus JgG (anti-HBcAg JgG) nukleáris antigén elleni antitestek

    Általában a szérumban nincs szérum anti-HBcAg.
    Anti-HBcAg-ban szenvedő betegeknél a JgG a vírus hepatitis B akut periódusában jelenik meg, és az egész életen át fennmarad. Az anti-HBcAg JgG az átadott HBV vezető markerje.

    Az anti-HBcAg JgG vérvizsgálatát használják a következők diagnosztizálására:

  • krónikus vírus hepatitis B HBs antigén jelenlétében a szérumban;
  • vírusos hepatitis B.
  • A kutatási eredmények értékelése

    A vizsgálat eredménye kvalitatívan - pozitív vagy negatív. Negatív eredmény azt jelzi, hogy nincs szérum anti-HBcAg JgG. Pozitív eredmény - az anti-HBcAg JgG azonosítása akut fertőzést, gyógyulást vagy korábban átadott B hepatitist jelez.

    Hepatitis B vírus "e" antigén (HBeAg)

    Általában a HBeAg a szérumban nincs jelen.
    A HBeAg megtalálható a legtöbb akut vírus hepatitis B-ben szenvedő beteg szérumában. Általában a vérben eltűnik a HBs antigén előtt. A HBeAg magas szintje a betegség első heteiben vagy annak kimutatása több mint 8 hétig okot ad a krónikus fertőzés gyanújának.

    Ezt az antigént gyakran vírusos etiológia krónikus aktív hepatitiszében észlelik. Különösen érdekes a HBeAg meghatározása, hogy a detektálása jellemzi a fertőző folyamat aktív replikációs fázisát. Megállapították, hogy a magas HBeAg koncentrációk megfelelnek a magas DNS-polimeráz aktivitásnak és jellemzik a vírus aktív replikációját.

    A HBeAg jelenléte a vérben azt jelzi, hogy nagy a fertőzőképessége, azaz az aktív hepatitis B fertőzés jelenléte a vizsgált testben, és csak HBs antigén jelenlétében mutatható ki a vérben. Krónikus aktív hepatitisben szenvedő betegeknél a vírusellenes szereket csak akkor alkalmazzák, ha a HBeAg-t a vérben észlelik. HBeAg - antigén - a hepatitis B vírus akut fázisának és replikációjának markerje.

    A HBe antigén jelenlétére szolgáló vérvizsgálatot használnak a következők diagnosztizálására:

  • a vírusos hepatitis B inkubációs periódusa;
  • a vírus hepatitis B prodromális periódusa;
  • a hepatitis B vírus akut periódusa;
  • krónikus, tartós vírus hepatitis B.
  • A kutatási eredmények értékelése

    A vizsgálat eredménye kvalitatívan - pozitív vagy negatív. A negatív eredmény a szérum HBeAg hiányát jelzi. Pozitív eredmény - a HBeAg kimutatása az akut vírus hepatitis B inkubációját vagy akut periódusát, vagy a vírus folyamatos replikációját és a beteg fertőzőképességét jelzi.

    A hepatitis B vírus "e" antigénjével szembeni antitestek (anti-HBeAg)

    Az anti-HBeAg szérumban általában nincs jelen. Az anti-HBeAg antitestek megjelenése általában a hepatitis B vírus és a beteg kisebb fertőzésének intenzív eltávolítását jelzi.

    Ezek az ellenanyagok az akut periódusban jelennek meg, és a fertőzés után 5 évig fennmaradnak. Krónikus, tartós hepatitisben a HBsAg-val együtt anti-HBeAg található a beteg vérében. Serokonverzió, azaz a HBeAg anti-HBeAg-ra való átállítása krónikus aktív hepatitissal, gyakrabban prognosztikailag kedvező, de ugyanaz a szerokonverzió nem javítja a súlyos cirrhotikus máj transzformáció előrejelzését.

    Az anti-HBeAg jelenlétére vonatkozó vérvizsgálatokat a következő esetekben alkalmazzák a vírus hepatitis B diagnózisában:

  • a betegség kezdeti szakaszának megállapítása;
  • akut fertőzés;
  • korai helyreállítás;
  • lábadozás;
  • a késői szakasz helyreállítása.
  • a közelmúltban átvitt vírus hepatitis B diagnózisa;
  • krónikus tartós vírus hepatitis B diagnózisa.
  • A kutatási eredmények értékelése

    A vizsgálat eredménye kvalitatívan - pozitív vagy negatív. A negatív eredmény azt jelzi, hogy a HBeAg antitestek nincsenek szérumban. Pozitív eredmény a HBeAg elleni antitestek kimutatása, amelyek jelezhetik az akut vírus hepatitis B kezdeti stádiumát, a fertőzés akut periódusát, a gyógyulás korai stádiumát, a gyógyulást, a közelmúltban átvitt vírus hepatitisz B-t vagy tartós B hepatitist.

    A krónikus hepatitis B jelenlétének kritériumai:

  • HBV DNS kimutatása vagy periodikus kimutatása a vérben;
  • az ALT / AST aktivitásának folyamatos vagy időszakos növekedése a vérben; t
  • a krónikus hepatitis morfológiai jelei a májbiopszia szövettani vizsgálatában.
  • A hepatitis B vírus PCR-rel történő kimutatása (minőségileg)

    A Hepatitis B vírus általában nincs jelen.
    A hepatitis B vírus minőségi meghatározása a vérben a PCR módszerrel lehetővé teszi a vírus jelenlétének megerősítését a beteg testében, és ezáltal a betegség etiológiájának megállapítását.

    Ez a tanulmány hasznos információkkal szolgál az akut vírus hepatitis B diagnózisára a betegség inkubációs és korai fejlődési stádiumában, amikor a beteg fő szerológiai markerei a vérben hiányoznak. HBeAg hiányában a betegek 50% -ában kimutatható a szérum vírus DNS. A PCR módszer analitikai érzékenysége nem kevesebb, mint 80 vírusrészecske 5 μl-ben, az utolsó DNS-detektálási minta, specifitás - 98%.

    Ez a módszer fontos a krónikus HBV lefolyásának diagnosztizálásához és megfigyeléséhez. A cirrózis és más krónikus májbetegségek körülbelül 5-10% -át a hepatitis B vírus krónikus hordozója okozza, ezeknek a betegségeknek a markerei a HBeAg és a hepatitis B vírus DNS jelenléte a vérben.

    A PCR módszer lehetővé teszi a hepatitis B vírus DNS-jének meghatározását a vérben mind minőségi, mind mennyiségi szempontból. A meghatározott fragmens mindkét esetben a hepatitis B vírus szerkezeti fehérje génjének egyedi DNS-szekvenciája.

    A hepatitis B vírus DNS kimutatása biológiai anyagban a PCR alkalmazásával szükséges:

  • a megkérdőjelezhető szerológiai vizsgálati eredmények megoldása;
  • a betegség akut stádiumának kimutatása az előző fertőzéssel vagy érintkezéssel összehasonlítva;
  • szabályozza a vírusellenes kezelés hatékonyságát.
  • A hepatitis B DNS vérből való eltűnése a terápia hatékonyságának jele

    A hepatitis B vírus PCR-rel történő kimutatása (kvantitatív)

    Ez a módszer fontos információt nyújt a betegség kialakulásának intenzitásáról, a kezelés hatékonyságáról és az aktív hatóanyagokkal szembeni rezisztencia kialakulásáról.
    A vírus hepatitis PCR-sel történő diagnosztizálásához szérumban vizsgálati rendszereket alkalmaznak, amelyek érzékenysége egy mintában 50-100 példány, ami lehetővé teszi a vírus 5 X 10 ^ 3 -10 ^ 4-es / ml koncentrációban történő kimutatását. A vírusos hepatitis B PCR-je feltétlenül szükséges a vírusreplikáció megítéléséhez.

    HBeAg hiányában a betegek 50% -ában kimutatható a szérum vírus DNS. A vérszérum, a limfociták és a hepatobiopszia anyagként szolgálhat a hepatitis B vírus DNS-jének kimutatásához.

    • A virémia szintjének értékelése a következő:
    • kevesebb mint 2,10 ^ 5 másolat / ml (kevesebb, mint 2,10 ^ 5 NE / ml) - alacsony virémia;
    • 2,10 ^ 5 példány / ml (2,10 ^ 5 NE / ml) és 2,10 ^ 6 / ml (8,10 ^ 5 NE / ml) közepes virémia;
    • több mint 2,10 ^ 6 másolat / ml - magas virémia.

    Az akut vírus hepatitis B kimenete és a HBV DNS koncentrációja között van összefüggés a beteg vérében. Alacsony szintű virémia esetén a fertőzés kronizálódási folyamata közel nulla, átlagban a folyamat 25-30% -a krónizálódik, és magas szintű virémia esetén az akut vírus hepatitis B leggyakrabban krónikussá válik.

    A krónikus HBV interferon-alfa kezelésére vonatkozó indikációkat figyelembe kell venni az aktív vírusreplikáció markereinek jelenlétében (a HBV HBV, HBeAg és HBV DNS kimutatása a vérszérumban az elmúlt 6 hónapban).

    A kezelés hatékonyságának értékelésének kritériuma a HBEAg és a HBV DNS eltűnése a vérben, amelyet általában a transzamináz szintek normalizálása és a betegség hosszú távú remissziója kísér, a HBV DNS a vérből a kezelés ötödik hónapjában eltűnik a betegek 80% -ánál. A kezelés kezdetétől számított harmadik napon a virémia szintjének 85% -kal vagy annál nagyobb csökkentése gyors és meglehetősen pontos kritérium a terápia hatékonyságának előrejelzésére.

    A hepatitis B PCR-elemzése

    A Hepadnaviridae család DNS-vírusa a hepatitis B közvetlen kórokozója. A hepatitis B PCR-elemzése lehetővé teszi a fertőzött DNS-vírus jelenlétét a beteg vérében. A HBV DNS pozitív típusának eredménye azt mutatja, hogy a beteg vérében a fertőzés jelen van. Meg kell jegyezni, hogy a PCR-analízis segítségével történő diagnózis nem csak a fertőzés jelenlétének meghatározását, hanem annak mennyiségi terhelését és aktivitását is lehetővé teszi. Ez a módszer megbízható, pontos és reprodukálható. A HBV DNS kvantitatív meghatározása a qPCR-vel a HBV-terápia hatékonyságának monitorozására használható, és hasznos lehet a HBV természetes előfordulásának megértésében endémiás területen.

    A hepatitisz B fertőzésének folyamata házi vagy szexuális érintkezés útján történik - a fertőzött vérrel való közvetlen érintkezés révén. A fertőzés után a vírus belép a májsejtekbe, amelyben aktívan szaporodik. A véráramban a kórokozó sejtek elterjedtek a testben. Érdemes megjegyezni, hogy a hepatitis B sejtek nagyon ellenállóak a savra és a magas hőmérsékletre. Hat hónapig képes fenntartani káros tulajdonságait.

    A hepatitis B PCR típusai

    Eddig kétféle diagnosztika létezik, ha feltételezzük a hepatitis B vírus jelenlétét: kvalitatív PCR (lehetővé teszi, hogy a vírus jelenlétének 100% -os pontosságával meghatározzuk a vérben) és a mennyiségi PCR-t (lehetővé teszi a vírusaktivitás mértékének meghatározását).

    Kiváló minőségű PCR-t írnak elő, ha a HBV fertőzés gyanúja áll fenn, vagy ha más diagnosztikai módszerek nem hoztak egyértelmű eredményeket. Ez a fajta PCR-analízis rendkívül könnyen megfejthető: negatív (a vérben nem található vírus), pozitív (a vérben kimutatott vírus). A kvalitatív elemzés fő feladata a fertőzött sejtek jelenlétének meghatározása a betegség korai szakaszában. Ha a vírust az állítólagos fertőzés után két héttel diagnosztizálták, a kezelés hatékonysága sokkal magasabb lesz. Ha a vírus a vérben körülbelül két hónap, a betegség krónikus lesz, ezért nem lehet teljesen gyógyítani.

    Ha a kvalitatív diagnózis megerősíti a HBV jelenlétét a vérben, az orvos kvantitatív elemzést ír elő.

    A kvantitatív elemzés lehetővé teszi a vírus fejlődésének aktivitását a beteg testében. Ez a fajta PCR-elemzés a következő:

    • meghatározza a betegség stádiumát;
    • az alkalmazott terápia hatékonyságának ellenőrzése;
    • meghatározzuk a vírus egy adott gyógyszerre való rezisztenciájának szintjét;
    • a gyógyszerek kiválasztására.

    A vérben lévő vírus mennyiségi mutatóit IU / ml vagy DNS-ben mérjük milliliterenként.

    Ha az orvos azonnal kvantitatív diagnózist ír elő, a minőségi ellenőrzés nélkül, akkor 75 NE / ml-t tekintünk normának. Ha kevesebb nemzetközi egységet észlelünk, az eredmény az, hogy a HBV nem észlelhető, ha a számok a normál érték felett vannak, a vírusos hepatitis B jelenlétét diagnosztizálják.

    A mennyiségi diagnózis értelmezése

    A következő mutatók (másolatokban / milliliterben) a hepatitis B esetében a CRP normájának tekintendők: kevesebb, mint 10 3 - inaktív vírus; 10-4-105 - a vírus általában inaktív; 10 - aktív vírus; 10 7 - vírus magas aktivitási fokozatban.

    A mennyiségi mutatók alapján 100% -os pontossággal meghatározhatjuk a betegség (hordozó, akut vagy krónikus) formáját, a vírusnak a kezelésre adott reakcióját, a további diagnosztika szükségességét.

    A hepatitis B krónikus formáját akkor állapítják meg, ha a vírus aktivitása 10,5 példány / ml. Egy hordozót diagnosztizálunk, ha a pontszámok 10,5 példány alatt vannak milliliterenként.

    A kezelés időtartama alatt rendszeresen (háromhavonta egyszer) meg kell ismételni a kvantitatív diagnosztikát annak érdekében, hogy figyelembe lehessen venni azt az időszakot, amikor a vírus az alkalmazott gyógyszerekkel szembeni immunitást fejti ki, és megváltoztatja a módszert. Ha minden vizsgálatot helyesen végeztünk, és egy hatékony kezelést választottunk, az ismételt elemzés (három napos kezelés után) legalább nyolcvanöt százalékkal csökkenti a patogén sejtek aktivitását.

    A májbiopsziát csak abban az esetben végezzük, ha a hat hónapos kezelés kimutatta, hogy az ALT szintje kétszer olyan magas, mint a normális, és a PCR diagnosztikája kevesebb, mint 10,5 másolatot tartalmaz.

    Felkészülés a felmérésre

    Az elemzéshez vénás vér szükséges. Annak érdekében, hogy a lehető legpontosabb eredményeket lehessen elérni, fel kell készülni az eljárásra: legalább nyolc órával a vérvétel előtt megtagadja az élelmiszer bevételét; két napig, hogy elutasítsák a kábítószer-kezelést (elengedhetetlen, hogy figyelmeztesse az orvost a gyógyszerek szedésére); húsz percet kell tölteni pihenő üzemmódban a véradás előtt; Tizenkét órával az eljárás előtt adja fel a sporttevékenységeket, az alkoholtartalmú italokat, a dohányzást és a zsíros ételeket.

    Fontos: ha öt évnél fiatalabb gyermeknél szükséges a diagnózis, akkor a vérgyűjtési eljárás előtt tíz percenként egy pohár forralt vizet kell adnia.

    Összefoglalva

    A hepatitis B PCR-elemzése ma a legpontosabb módszer a vírus diagnosztizálására. A módszer lehetővé teszi a betegség mutált és rejtett formáinak meghatározását, a fertőzés első napjaiban a betegség diagnosztizálását, így a leghatékonyabb kezelés kiválasztását. A laboratóriumi asszisztens összehasonlítja az elemzés eredményeit a normával, majd a következtetésekhez vezet. Az adatokat két héten belül feldolgozzuk. A PCR-analízishez való utalás érdekében egy hepatológussal, egy fertőző betegséggel foglalkozó szakemberrel vagy egy virológussal kell kapcsolatba lépni. Fontos megjegyezni, hogy minél hamarabb jut el az orvoshoz, annál gyorsabb az eredmény, ezért minél hatékonyabb lesz a kezelés.

    A PCR és a hepatitis biokémiai elemzése

    A hepatitis gyulladásos folyamat a májban, melyet a sejtek mérgező anyagok által történő megsemmisítése okoz. A hepatitis elemzésének megfejtése lehetővé teszi a májbetegségben szenvedő beteg egészségi állapotának objektív megítélését. A fertőző betegségek orvosa elmondja, hogyan kell megérteni a vizsgálat eredményeit, és további kezelést ír elő. A beteg, miután önállóan tanulmányozta a kapott adatokat, bizonyos következtetéseket von le, amelyek nem mindig felelnek meg a valóságnak.

    A hepatitis B vírus megtalálható a szérumban, és a specifikus laboratóriumi diagnosztikai módszerek lehetővé teszik a patogén antigének és ellenanyagainak kimutatását.

    A hepatitis tesztek listája

    A máj vírusos gyulladásának diagnózisát speciális vizsgálatok igazolják. A kezelés megkezdése előtt a pácienst tesztelik:

    1. A páciens reggel vérben, 7.00 és 9.00 óra között nyújt vizsgálatot. A páciensnek 12 órát kell tartózkodnia. A hepatitis B kvantitatív elemzése meghatározza a vírus és az antitest titer jelenlétét a szérumban. Ugyanakkor az orvos egy olyan vizsgálatot ír elő, amely a HBV DNS-t PCR reakciók segítségével azonosítja.
    2. A fertőzött betegekben az Anti-HBc IgG fehérje és a HBsAg antigén jelenlétét állapították meg. A specifikus immunglobulin a hepatitis vírus koncentrációjának gyors növekedését jelzi a beteg szérumában. Az Anti-HBc negatív vizsgálata esetén az IgG további kutatást végez más betegségek jelenlétére vonatkozóan.
    3. A betegség súlyosbodásának időszakát vizsgálva meghatározzák a HBeAg és az Anti-HBc IgM immunglobulinokat. A helyes diagnózis megállapítása csak a vírusos RNS felfedezése után lehetséges - ebben az esetben a hepatitist a molekuláris-biológiai módszer megerősíti.
    4. A PCR-t széles körben alkalmazzák a májbetegségek diagnosztizálására - a kvantitatív módszer lehetővé teszi a hepatitis hatékony kezelését.

    Immunológiai vizsgálat

    Annak megállapításához, hogy a beteg képes-e kezelni egy veszélyes vírust, diagnosztizálja a testellenállás szintjét. A laboratóriumi vizsgálatok teljes komplexének köszönhetően az immunológiai faktorok mennyiségi és minőségi mutatóit állapítják meg - a hepatitis B elleni antitestek.

    A HBsAg fehérje olyan felületi antigén, amely a patogén szuperkapszidjának (virális burkolatának) egy komponense. Fő funkciója az egészséges májsejtek vírusadszorpciójának folyamatában való részvétel. A HBsAg peptid ellenáll a környezeti tényezőknek - alkáli (Ph = 10), 2% klór-amin és fenol oldatnak.

    A HBsAg marker egy fertőzött személy szérumában van jelen. Közvetlenül a megjelenése után az RNS nemcsak a szintézisét fordítja le, hanem az előző markerben lévő Ar-részecskéket is tartalmaz. Ez bizonyítja a hepatitis aktív fázisának kialakulását.

    A HBeAg jelenléte egy krónikus betegben a fertőző folyamat aktív szakaszának kezdetét jelzi.

    Az anti-HBc marker 2 típusú antitestet tartalmaz - IgG és IgM. Ez egy antigénre specifikus fehérje. A betegség akut formáját az Anti-HBc és az IgM jelenléte jellemzi. Pozitív értékük korábbi májbetegséget jelez.

    Kvantitatív elemzés

    A kórokozó aktivitásának meghatározására PCR-analízist írunk elő. Meghatározza a vírusterhelés szintjét és a beteg esélyét. A polimeráz láncreakciót a látens időszak vége után hajtjuk végre. A kutatás során nem csak a HBsAg-t határozzuk meg, hanem a HBeAg-markert is.

    A hepatitis PCR-elemzésének dekódolása lehetővé teszi a patológiai folyamat aktivitásának mértékének és a komplex terápia hatékonyságának meghatározását.

    Az orvos határozza meg, hogy a beteg teste mennyire érzékeny a vírusellenes szerekre, és hogy lehet-e intézkedéseket tenni a krónikus májbetegség okainak kiküszöbölésére. Ebben az esetben a transzamináz index növekszik, és a kórokozó aktivitás indexe többszöröse a normál indexhez képest, az aminosav koncentráció több mint 106 DNS-másolat / ml.

    A vérben a transzamináz norma megfelel az AsAT és az AlAT enzimek értékeinek. A nőkben az alanin-aminotranszferáz nem haladja meg a 32 U / l-t, a férfiaknál pedig 40 U / l. A vírus koncentrációja a korai életkorban fertőzött emberek esetében 100 000 példány / ml.

    A vírus inaktív fázisában és az Anti-HBc esetében a HBV DNS értéke 2000 IU / ml, és a példányszám nem haladja meg a 10 000-et.

    Molekuláris hibridizációs módszer

    A hepatitisre adott ELISA válasz meghatározza az antitestek és az enzimek antigén típusát. A fokozatos kutatás elfogadható, de csak egy szakember, aki időben kapott elemzést, megteheti a helyes diagnózist.

    A vírus hepatitis markerei az immunvizsgálat során HBsAg, Anti-Hbcor IgM. A betegség kezdetén emelkednek: PPBR-1,55, OPcr-0,27, HBsAg 1,239, vírus DNS-t nem észlelünk. A kezelés után az elemzés eredményei azt mutatják, hogy a HBsAg 1,07-re csökken, és a HBeAg negatívvá válik. Vírus DNS van jelen.

    Ha negatív IgM, IgG, IgA értékeket kapunk, akkor meg kell határozni, hogy a betegség hiányzik-e, vagy teljesen helyreállt.

    A pozitív IgG-érték teljesen kialakult immunitást jelez. Ebben az esetben az IgM nem észlelhető. Fontos tudni, hogy a hepatitis vizsgálata magas IgM titeret mutat.

    A betegség akut periódusában negatív IgG értékek jelennek meg. A vírusos betegség elengedését negatív immunglobulin IgM kísérli. Az ELISA viszonylag egyszerű és biztonságos a beteg egészségére nézve.

    Biokémiai vérvizsgálat

    A szérum vizsgálata a szervezet patológiáját azonosítja, meghatározza a diagnózist, lehetővé teszi a máj munkájának értékelését és az anyagcserével kapcsolatos információk megszerzését. A biokémiai elemzést reggel végezzük. A vénás vérből származó anyag kutatására.

    Fontos, hogy kövessük a hepatitis C vizsgálatára vonatkozó előkészítési szabályokat - ebben az esetben az összes indikátor dekódolása nem torzul. A teljes bilirubin általában 8,55–20,2 mmol / l, és annak növekedése a májbetegség megjelenését jelzi. A hepatitis B esetében az AlAT és az AsAT értékei is emelkednek.

    Egy egészséges betegben az albumin 35–55 g / l. Az alacsony plazmafehérjék szintje a máj vírusos gyulladását jelzi.

    A normál LDH-index 125–250 U / l tartományban van, és növekedése a beteg szerv sejtjeinek deformálódását és pusztulását jelenti. Az LDH (szorbit-dehidrogenáz) indikátora a májszövet állapotát jelzi. A rendes érték 0–1 U / l. A növekedési sebesség a hepatitis B akut lefolyásának vagy a krónikus stádiumba való átmenet jellegzetes összetevőjének.

    A GGG fehérje aktivitása alacsony a vérplazmában.

    Növekedését a máj gyulladásában figyelték meg, és hosszú ideig fennmarad. Norm - 25–49 U / l férfiaknál, a nőknél a mutató jelentősen alacsonyabb - 15–32 U / l.

    A krónikus hepatitis B jelek dekódolása

    A májbetegség markereinek azonosítása az orvos fő feladata, aki megpróbálja megakadályozni a diagnózis hibáit. Fontos tudni, hogy az alábbi fiziológiai tényezők befolyásolják az elemzési eredményt:

    Az antigének táblázata és dekódolása lehetővé teszi, hogy a beteg megismerje a betegség természetét.

    A hepatitis B PCR típusai és az eredmények értelmezése

    A polimeráz láncreakció egy olyan vérvizsgálat, amely pontosan képes felismerni a hepatitis B vírust. A módszer egyik jellemzője, hogy a HBV-t korai stádiumában képes megjeleníteni - egy hónappal a fertőzés után, míg egy specifikus antigént a betegben csak 2 hónap elteltével mutatnak ki. A PCR nemcsak normál DNS-vírust, hanem mutáns törzseket is észlel, amelyeket más elemzés nem mutat.

    A hepatitis B PCR dekódolásakor az eredményeket összehasonlítjuk a standard értékekkel. Ennek alapján következtetéseket vontunk le a betegség jelenlétéről (pozitív eredmény), a vírus koncentrációjáról (aktivitás) vagy a betegség hiányáról (negatív eredmény). Az adatfeldolgozás 2 hét.

    A vírus hepatitis B PCR típusai

    A B hepatitisz esetében kétféle diagnosztika létezik. A kiváló minőségű PCR lehetővé teszi 100% -os pontossággal azt, hogy a HBV a vérben van-e. A kvantitatív PCR a vírus aktivitását mutatja, azaz, hogy mennyi HBV DNS-t tartalmaz 1 ml vérben.

    Kiváló minőségű PCR és annak értelmezése

    A hepatitis B PCR-vel végzett vérvizsgálata csak a DNS-fragmensek jelenlétét érzékeli. Azon esetekben kerül sor, amikor a beteg HBV-fertőzést (HBV) gyanít, vagy más diagnosztikai módszerek, például a szerológiai vizsgálatok nem adnak egyértelmű választ. Az eredmények dekódolása minőségi elemzés során nagyon egyszerű:

    • negatív eredmény - nincs vírus;
    • pozitív eredmény - a vírus kimutatható.

    A kiváló minőségű PCR célja a hepatitis B vírus jelenlétének megerősítése vagy megtagadása, valamint korai diagnózis elvégzése. Ha a fertőzés után 1-2 héten belül észlelhető a HBV, a kezelés a lehető leghatékonyabb. A HBV 2 hónapos vagy annál hosszabb ideig tartó aktív fejlődésével a betegség krónikusvá válik, és nem lehet teljesen gyógyítani.

    Abban az esetben, ha a hepatitis magas minőségű PCR-jét egy vírus jelenléte jelzi, a következő lépés kvantitatív diagnózis lefolytatása.

    Kvantitatív PCR

    A terápia eredményeinek hatékony kezelése vagy értékelése céljából nem elég tudni, hogy a betegnek HBV-je van. Szükséges a hepatitis B vírus DNS értékének számszerűsítése 1 ml vérben, azaz a testen lévő vírusterhelésben. A hepatitis B-hez hasonló PCR-t a következő esetekben végezzük:

    1. A kezelés megadása előtt.
    2. A terápia hatékonyságának értékelése.
    3. A vírusrezisztencia kialakulásának meghatározása a bevitt gyógyszerekre vonatkozóan.
    4. Annak meghatározására, hogy a betegség mely szakaszában van.

    A vírus mértékegysége a nemzetközi egységek (IU / ml) vagy a DNS-másolatok száma / ml, azaz a DNS-fragmensek száma 1 ml vérre vonatkoztatva. A két egység aránya a kiválasztott vizsgálati rendszertől függ, és 2 és 7 másolat / ml között van 1 NE / ml-ben. Ha a rendszer ismeretlen, akkor az átlagolt értéket használják az átalakításhoz:

    1 NE / ml = 5 példány / ml

    Ha a kvantitatív elemzést azonnal elvégezzük, a betegség diagnosztizálásához szükséges marginális sebesség 75 NE / ml. Ha az eredmény meghaladja ezt a mutatót, akkor a HBV diagnózisa készül, az alábbiakban - a HBV nem észlelhető.

    Kvantitatív PCR kezelése

    A hepatitis B esetében a PCR-szabványok a következő vírusterhelési (virémia) értékek, másolatok / ml:

    • 10 ^ 5 példány / ml. Amikor nagy vírusaktivitással hat hónapon belül 2-szer gyakrabban emelkedik az ALT szintje, akkor az antivirális terápiát azonnal felírják.

    Ahhoz, hogy megtudjuk, hogyan viselkedik a DNS-hepatitis a kronizáció szempontjából, azaz a krónikus formába való átmenet akutból, a PCR-diagnosztika eredményeit is használják:

    • A 2 x 10 ^ 6-os / ml-es HBV DNS azt jelenti, hogy a betegség krónikus formájának megszerzése elkerülhetetlen.

    Felkészülés a felmérésre

    A HBV jelenlétének PCR-rel történő meghatározásához vért veszünk. Az eljárást mindig szigorúan üres gyomorban végzik, és a legjobb, ha reggel eljut a laboratóriumba, amikor a nyugalom természetes ideje 8 óra. Annak érdekében, hogy a vizsgálat eredményei helyesek legyenek, előzetesen tudni kell, hogyan kell felkészülni a klinika helyes meglátogatására. További lépések a következők:

    1. A zsíros ételek, a dohányzás, az alkohol és a sport megtagadása 12 órával az eljárás előtt.
    2. A véradás előtt 20 percig pihenjen.
    3. Az eljárás megkezdése előtt a nővért figyelmeztetni kell az alkalmazott gyógyszerekre.

    Figyelem! Ha a diagnózist egy 5 évesnél fiatalabb gyermeknek, majd fél órával az eljárás előtt végezzük, 10 percenként 1 pohár főtt vizet kell inni.

    Összefoglalva

    A hepatitis B kimutatására szolgáló PCR diagnosztika a legpontosabb módszer. A módszer lehetővé teszi a betegség rejtett és mutált formáinak megismerését, a betegség azonosítását a fertőzés utáni első hetekben, és ennek megfelelően hatékony kezelés elvégzését. A helyzettől függően kvalitatív vagy kvantitatív PCR-t végeznek, amelyek célja a HBV kimutatása és aktivitásának megállapítása. A teszteléshez forduljon virológushoz, fertőző betegségek szakemberéhez vagy hepatológushoz.

    A hepatitis B-re vonatkozó PCR-elemzés és annak eredményeinek lényege

    A vírusos hepatitisz B sikeresen kezelhető, ha azt időben észlelik, és a beteg vérében található antitestek és antigének száma helyesen van meghatározva. A hepatitisz enzim immunvizsgálata segítségével kimutatható a vírus markerek jelenléte, de nem tudják meghatározni a folyamat pontos szakaszát.

    Kvantitatív értékeléshez PCR diagnosztikát alkalmaztunk. A teszt segítségével számolható a markerek száma, megjósolhatja a betegség lefolyását és a vírusellenes gyógyszerek segítségével a gyógyulás valószínűségét.

    A vizsgálat fő előnye, hogy képes a vírus minimális koncentrációinak kimutatására, a fajok azonosítására.

    A hepatitis B diagnózisa

    A hepatitis B vírus nagyon fertőző és külső hatásokkal szemben ellenálló. Több hétig aktív marad a beteg vérében. Ezért minden személy fertőzésveszélyben van, még akkor is, ha profilaxis figyelhető meg.

    A betegség diagnosztizálásához a következő vizsgálatokat kell végezni:

    A PCR módszer lényege

    K.Mullis amerikai kémikus megkapta a Nobel-díjat, és diagnosztikai módszerét még mindig használják.

    A PCR módszer (polimeráz láncreakció) őse a norvég H. Kleppe tudós. Először elkezdte a DNS amplifikációját (helyreállítását) rövid DNS-lánc, azaz szintetikus primer (egyfajta másolat) felhasználásával.

    A tudós azonban nem tudta megvalósítani az ötletét. Hasonló tanulmányokat készített az amerikai kémikus, K. Mullis, aki 1993-ban a Nobel-díjat kapott a találmányaért. Azóta a PCR-t használták az apaság megállapítására, a genetikai betegségek diagnosztizálására és a vírusok kimutatására.

    A reakció lényege, hogy enzimek segítségével egy bizonyos DNS-t másolunk. Csak azt a területet másolhatja, amely megfelel a megadott paramétereknek, és ha az szerepel a bemutatott mintában. A következő összetevőket használják a reakció elindításához:

    1. A mátrix DNS egy másolandó helykel.
    2. A DNS-hez hasonló szerkezetű primerek.
    3. Polimeráz, azaz a reakciót kiváltó enzim. Termostabilnak kell lennie, azaz ellenállnia a szélsőséges hőmérsékleteknek.
    4. Megoldás bizonyos paraméterekkel, biztosítva a reakció áthaladását.

    A reakció több lépésben történik:

    A hepatitis B kimutatásához kétféle reakciót alkalmazunk: mennyiségi és minőségi.

    Kvantitatív PCR

    A kvantitatív módszer meghatározza a HBV genom mennyiségét

    A kvantitatív PCR a DNS-fragmensek másolatainak egyidejű létrehozását és a molekulák számának meghatározását foglalja magában. A mérést minden szakasz után, azaz valós időben végzik. Ezt úgy érjük el, hogy fluoreszcens próbákat alkalmazunk, amelyek a molekulák láncában vannak, és a vizsgálat egy bizonyos időszakában ragyognak.

    Ezt a módszert alkalmazzuk a hepatitis vírus markereihez tartozó DNS-fragmensek kimutatására. A kvantitatív módszer alkalmazásával lehetséges a vírus genotípus pontos izolálása. Más szavakkal, kiszámítjuk a HBV-genom példányszámát a betegsejtek számára.

    A mennyiségi elemzés a következő kérdésekre ad választ:

    1. Milyen intenzitással halad a betegség.
    2. Mennyire hatékony a kezelés.
    3. Kidolgozta a gyógyszerellenállást?

    Ezenkívül kvantitatív mérés szükséges a fertőzés krónikus stádiumának diagnosztizálásához. Ha a DNS mennyisége a normál transzaminázszint alatt 100 db / ml alatt van, akkor a személy a vírus hordozója.

    Az akut fázisban az antitestek mennyisége sokkal magasabb, a vírusellenes terápiában az antitestek számának növekedése a gyógyszer rezisztencia kialakulását jelzi, ez egy jel a kezelés módosítására.

    Kiváló minőségű PCR

    A kiváló minőségű PCR kevesebb információt ad, de megszünteti a fertőzést.

    A kiváló minőségű PCR csak a kórokozó jelenlétét állapíthatja meg a vérben. Ha hiányoznak, a beteg nem fertőzött, ha a kórokozó belép a vérbe, az eredmény pozitív lesz.

    A kvalitatív reakció segítségével azonban nem lehet tisztázni a vírus genomját, a betegség stádiumát. Ezért a HBV diagnózisához mind kvantitatív, mind kvalitatív mérést végeztünk.

    Felkészülés a felmérésre

    A PCR-analízishez vénás vér szükséges. Ezt reggel kell végezni egy üres gyomorban.

    A betegnek megfelelően fel kell készülnie a vizsgálatra:

    1. Az étel visszautasítására 10 órán át csak tiszta vizet fogyaszthat.
    2. Az alkohol szedésének előestéjén 4 órán át nem dohányzik.
    3. A vizsgálat előtt kerülni kell a fizikai és érzelmi stresszt.
    4. 2 napig hagyja abba a gyógyszert, ha ez nem lehetséges, értesíteni kell a laboratóriumi technikust. Néhány gyógyszer hatással van a végeredményre.

    Az adatok értelmezése

    Kvantitatív reakcióban a kapott mutatókat a DNS-másolatok számától függően értékeljük.

    Könnyen értelmezhető a minőségi mérési adatok. Pozitív vagy negatív választ ad.

    Kvantitatív reakcióban a kapott mutatókat a DNS-másolatok számától függően lehet értékelni. A mértékegység másolatok / ml.

    Az adatokat a következőképpen dekódoljuk:

    1. Ha a HBV DNS mennyisége kisebb, mint 90, akkor a fertőzés hiányzik. A beteg vakcináció utáni immunitás alakult ki, vagy meggyógyult a betegségből.
    2. Amikor a példányszám 2x100 beszél a vírus hordozójáról.
    3. A 2x106 szám a betegség krónikus stádiumát jelzi.
    4. Ha a DNS több mint 2x109, a betegnek hepatitisz akut fázisa van.

    Hibás eredmények

    A diagnosztikai módszer előnyei a polimeráz reakciók alkalmazásával a következők:

    1. A kórokozók közvetlen kimutatása. Ezzel szemben az ELISA információt szolgáltat a vírus elleni antitestek jelenlétéről.
    2. Sajátosságai. Ez azt jelenti, hogy a biológiai anyagmintában jelen van a DNS-régió, amelyet másolunk.
    3. Túlérzékenység. Az eljárás akár egyetlen sejtfragmenseket is kimutathat.
    4. A betegségek diagnózisa akut és látens szakaszokban. Vagyis a betegséget a preklinikai megnyilvánulások szakaszában lehet diagnosztizálni.

    A módszer hibái hamis eredményekhez vezetnek. A legjelentősebb hátrány az anyag szennyeződésének valószínűsége. A szennyeződés fő forrása a rosszul feldolgozott kémcsövek, laboratóriumi kezek, reagensek.

    Az előző reakcióból származó DNS egy része bejuthat a vérbe. Ezért a laboratóriumok számára megnövelt szaniter követelmények vonatkoznak: külön helyiségek, műanyag csövek, laboratóriumok ultraibolya kezelése stb.

    A hamis negatív eredményeket a reakció csökkent érzékenysége okozhatja. Ez a következő helyzetekben történik:

    • a beteg gyógyszert szed, például antikoagulánsokat;
    • a személy fizikai stresszt szenvedett el az elemzés előtt (sportolás, kemény munka);
    • fertőzés történt.

    Ha a betegnek nagy a fertőzés valószínűsége, és a vizsgálat eredménye negatív, újra kell vizsgálni.

    Lásd még:

    következtetés

    A polimeráz láncreakciós módszer a HBV diagnózisa szempontjából a legfontosabb és leginkább informatív. Lehetővé teszi nemcsak a fertőzés hordozói állapotának megállapítását, hanem a betegség stádiumának tisztázását is, a kezelés eredményeinek értékelésére.

    A pontosabb diagnózis érdekében minőségi és mennyiségi mérést alkalmaznak. A módszer hátrányai közé tartozik a szennyeződés valószínűsége, a csökkent érzékenység és a meglehetősen magas ár.

    Annak érdekében, hogy az eredmények a legmegbízhatóbbak legyenek, fel kell készülnünk a tanulmányra, és a megfelelő klinikai szakszolgálattal, megfelelő engedéllyel és jó hírnévvel kell ellátni.

    Hepatitis B DNS és PCR

    A hepatitis B vírus DNS-tesztjei és PCR-je a legérzékenyebb tesztek, amelyek kimutatják a májban lévő molekuláris DNS-nyomokat, amelyek azonosítják a vírus jelenlétét. A módszer lényege a betegség okozójához tartozó DNS-fragmens többszörös másolása.

    A hepatitis B típusú PCR egy külső kémiai reagens és a vizsgált biológiai anyag polimeráz láncreakciója, amelynek célja a vírus DNS-molekuláinak a vérben történő azonosítása és mennyiségi mutatói térfogatra vonatkoztatva. Az elemzés az alábbi esetekben van hozzárendelve:

    • ha a beteg hepatitis B jeleit tapasztalja;
    • a vegyes hepatitis diagnosztikai tevékenysége során;
    • a terápia hatékonyságának tisztázására.

    PCR-analízishez vénás vért gyűjtünk. A vizsgálat előtt tartózkodnia kell körülbelül 8 órás étkezéstől.

    A vírusban lévő DNS kimutatásakor a normál eredmény „nem észlelhető”. Ez azt jelenti, hogy a vírus hiányzik a vérben, vagy annak tartalma elhanyagolható. A végső diagnózist csak szakember végezheti a B-típusú hepatitis vérplazma átfogó biokémiai és immunológiai elemzése alapján. Az öngyógyítás túl sok kockázatot jelent.

    A vénás vérmintát a PCR analízishez végezzük.

    A PCR módszer lehetővé teszi a kórokozó DNS kimutatását még akkor is, ha a kiválasztott vérminta minimális jelenlétével rendelkezik. Ezenkívül az elemzés lehetővé teszi a vírus számára már kifejlesztett antigének kimutatását. Mindegyik antigén a betegség egy bizonyos szakaszát jelzi:

    • HBsAg - a vírus jelen van.
    • Anti-HBcor - kórokozó nincs jelen, de volt a múltban.
    • Anti-HBs - a vérben hepatitis B elleni antitestek (opcióként - herpesz, HIV, chlamydia, mikoplazmózis, kandidózis, tuberkulózis, kullancs-encefalit és sok más betegség).

    Patológia és annak jelei

    A hepatitis B vagy HBV egy vírusfertőzés, amely a májsejteket érinti. Veszélyes nemcsak a szerv parenchyma elleni közvetlen cselekvés, amely gyengíti a barrier funkciót és az általános immunitást. Súlyosabb következményekkel járhat, mint például a máj cirrózisa és a rosszindulatú daganatok előfordulása.

    A HBV-t hepatitisben fertőzött személy vérén, ürülékén keresztül, nyálkahártyákkal érintkezve, különösen szexuális közösülés, bőrelváltozások, nem steril fecskendők, vérátömlesztés során vagy hasi műtétek során továbbítják. Az újszülöttet beteg anyja fertőzheti meg, amikor megérinti a mellbimbóinak repedéseit.

    A következő tünetek a hepatitis B-re jellemzőek:

    Szokatlan fáradtság

    • növekvő fáradtság alacsony terheléseknél;
    • szokatlan fáradtság;
    • nehézség a jobb hypochondriumban;
    • csökkent étvágy, hányinger;
    • a bőr sárgasága, a szem szikra;
    • fényes széklet;
    • sötét vizelet;
    • fájdalom az ízületekben.

    Az inkubációs periódus, amely után ezek a tünetek megjelennek, egy-hat hónap. Ez a vírussejtek felhalmozódásának ideje a májban. Amikor a koncentráció eléri a kritikus tömeget, a vírus megtöri a hepatociták membránjait, és továbbra is szaporodik a sejtekben. Ennek eredményeképpen a májsejtek meghalnak, cirrhosis alakul ki, amely megfelelő terápiás intézkedések hiányában végzetes lehet a betegnek. A PCR és a hepatitis B DNS időben történő vérvizsgálata segít elkerülni a negatív eredményeket.

    A PCR indikációi a következők:

    • pozitív hepatitis B diagnózisát igazoló DNS-teszt;
    • akut és krónikus hepatitis;
    • vegyes hepatitis;
    • a vírus mennyiségi meghatározása a vérszérumban;
    • a hatékony terápia taktikájának kialakítása.

    Előkészítés az elemzéshez

    A PCR-t használó diagnózis előkészítését a biomedium típusa határozza meg. Tehát a vér és a vizelet csak reggel, üres gyomorban adományoz. Szintén kenetet és kaparót vettünk az urogenitális területről. A nők számára az egyetlen korlátozás a menstruáció. A szex mindkét nem esetében korlátozott a kutatás előestéjén.

    A PCR eredményei csak akkor tekinthetők megbízhatónak, ha a beteg megfelelően felkészült az eljárásra. Ez a tanulmány a következő feltételeket tartalmazza:

    • teljes lelki kényelmet, minden izgalom hiányát. Annak biztosítása érdekében, hogy ez az elemzés akár otthon is eljusson. Csak az orvoshoz kell fordulni a megfelelő felszereléssel;
    • az élelmiszer, az alkohol, a dohányzás, a fizikai aktivitás elmaradása legalább 8-12 órával az elemzés előtt, ellenkező esetben a kutatási adatok torzulnak;
    • 15-20 perc teljes relaxáció a vérvétel előtt;
    • a gyógyszerek megszakítása (ha ez nem lehetséges, a laboratóriumot figyelmeztetni kell);
    • öt éven aluli gyermekeket fél órával az elemzés előtt főtt vizet kell adni, hogy kis adagokban inni.

    Hogyan történik a tanulmány

    A PCR-analízis a molekuláris biológia által alkalmazott elveken alapul. Ezek olyan speciális enzimek használatát foglalják magukban, amelyek hasítják és replikálják a vérben található fertőző ágens DNS és RNS részeit. E művelet után a kapott mintákat a laboratóriumban elérhető adatbázis segítségével azonosítják. Ugyanakkor kimutatható a fertőzés típusa és a kórokozó vérében lévő koncentráció.

    A vizsgálathoz egy erősítőt használunk - egy termosztátot, amely alkalmas csövek biomateriális fűtésére és hűtésére. Ez szükséges a replikációs folyamatok aktiválásához. Az elemzés pontossága a hőmérsékleti paraméterek pontosságától függ.

    Dekódolás eredményei

    A páciens számára pozitív eredmény a „nem észlelt” laboratóriumi következtetés. Ez azt jelenti, hogy a vérben nincs hepatitis B DNS, számszerűen ez körülbelül 120 NE / ml, vagy 200 másolat ugyanazon vérmennyiségegységenként. Ez az érték a norma. A biológiai anyagra vonatkozó követelmény az, hogy ne legyen szennyezett.

    Más elemzési eredmények dekódolása lehetővé teszi a következő diagnózisok készítését:

    • A hepatitis B DNS-koncentrációja a vérben több mint 200 példány, de a kritikus szint alatt van. Súlyos patológia hiányzik.
    • Enyhe formájú virémia, legfeljebb 500 példány / ml. A kezelés választása függ a májbiopsziától és a funkciók romlásának mértékétől.
    • Megnövekedett víruskoncentráció (több mint 500 másolat / ml). A gyulladásos folyamat az aktív fázisban, és intenzív vírusellenes terápiát igényel.
    • Maximális vírusterhelés (több mint 800 példány / ml). A terápiás intézkedéseket a beteg állapota alapján fejlesztették ki, és teljes mértékben a lehető legnagyobb javulásra irányulnak.
    A beteg számára a jó eredmény az a következtetés, hogy "nem észlelt"

    A hepatitis B DNS-tartalmának mennyiségi mutatóinak meghatározása a PCR során a terápiás kurzus megválasztásának alapja. Három vagy hat hónap elteltével a vizsgálatokat ismételten végezzük a vírusellenes kezelés hatékonyságának tesztelésére.

    Polimeráz láncreakció

    A PCR módszerében a vírushoz tartozó DNS meghatározásához két megközelítést alkalmazunk: kvalitatív és kvantitatív.

    A kvalitatív megközelítés megerősíti vagy tagadja a hepatitis B jelenlétét. A PCR-t olyan beteg kérésére írják elő, aki gyanítja, hogy HBV fertőzéssel fertőzött, vagy abban az esetben, ha a korai diagnózis nem ad egyértelmű eredményt más módon.

    Ha a hepatitis B vírus a szervezetbe való belépés után legkésőbb két héttel kimutatható, a kezelés valószínűleg pozitív prognózisa. A jövőben a betegség előrehalad. Körülbelül két hónap múlva krónikus fázisba lép. A teljes gyógyulás ebben az esetben lehetetlenné válik.

    A PCR-hez kvantitatív megközelítést csak akkor használunk, ha vírust észlelünk. Értékeli:

    • specifikus vírusterhelés a májra;
    • a betegség progressziójának intenzitása;
    • antivirális gyógyszerekkel szembeni rezisztencia;
    • a kezelés hatékonysága.

    Ezek a mutatók közvetlen gyakorlati jelentőséggel bírnak. Különösen a DNS mennyiségi mutatója. A hepatitis B akut fázisában a prognózis a vírus koncentrációjától függ a máj véráramában, így a vírussejtek alacsony koncentrációja szinte teljesen kizárja az akut és krónikus hepatitis átmenetét. Az ilyen betegek nem jelentenek veszélyt másokra. A magas vírusterhelés hozzájárul a kóros folyamat kronizációjához és a hepatitis fertőzés lehetőségéhez azoknál az embereknél, akik érintkeznek a pácienssel.

    A vírus gének koncentrációja a vérben és a máj cirrhotikus degenerációja és a parenchyma rákos megbetegedése között is fennáll.

    A PCR-vizsgálatok segítenek az orvosnak a vírushordozók kimutatásában.

    A vírusellenes kezelés hatékonyságát a hepatitis B DNS koncentrációjának csökkenése határozza meg a máj keringésben. Megfelelő eredmény a vírusterhelés csökkentése 1-2 alkalommal intenzív kezeléssel, három hónaptól hat hónapig. Az alacsonyabb arányok megkövetelik a kezelést.

    A patológia kialakulásának előrejelzése és a megfelelő terápia kijelölése:

    • a májvírus DNS mennyiségi térfogata a vérszérumban;
    • kapcsolódó biokémiai paraméterek (például a vérben levő leukociták szintje és a bilirubin tartalma);
    • vírusfertőzési markerek;
    • májbiopsziás eredmények.

    Általános célú PCR

    A polimeráz láncreakció segítségével végzett elemzések segítenek az orvosnak:

    • detektálja a vírus hordozóit;
    • megjósolni a hepatitis B típusú fejlődést;
    • győződjön meg arról, hogy a betegség krónikus lesz;
    • figyelemmel kíséri a vírus aktivitását a fejlődés minden fázisában;
    • azonosítja a hepatitis B mutáns és rejtett törzseit;
    • értékelje a vírus kezelésének hatékonyságát egy bizonyos taktika megválasztásakor, és nem megfelelő siker esetén változtassa meg.

    A módszer előnyei

    A hepatitis B diagnosztizálására használt más vizsgálatokkal ellentétben a PCR-nek:

    A PCR-analízis rendkívül érzékeny.

    1. Kivételes érzékenység. A technika lehetővé teszi a kutató számára, hogy kimutassa a betegség okozóját, még akkor is, ha a DNS-molekulák koncentrációja a vérben minimális. Ez lehetővé teszi, hogy megelőző és gyógyító intézkedéseket tegyenek a betegség korai szakaszában, amikor nyilvánvalóan még nincsenek tünetei.
    2. A lehetőségek széles köre. A PCR nemcsak a vírusos hepatitisz B okozójait, hanem számos más patológiát is észlel.
    3. A megközelítések egyetemessége. A kutatáshoz használt biomateriális lehet vér, nyál, nyálkahártya és bőr.
    4. Hatékonyságát. A következtetés pontosan egy nappal a vérmintavétel után fog elkészülni (az elemzés eredményét legkésőbb 7 órán belül).
    5. Megbízhatóságát. A PCR-módszer minden körülmények között soha nem mutat hamis adatokat.
    6. Ár-hozzáférhetőségi tanulmány. Költség esetén a PCR csak kissé magasabb, mint a szokásos vizsgálatok, amelyek a véranyagot biomateriálisként használják.

    A kutatás egyetlen költsége a technológiai összetettsége. A PCR magas színvonalú megvalósításához rendkívül tiszta bioanyagot, modern felszerelést és jól képzett személyzetet igényel. Előnyösebb, ha a diagnosztikát erre a módszerre alkalmazzák speciális laboratóriumokban.

    A vírusos hepatitis B betegségekre utal, amelyek teljes gyógyulása csak a fejlődés legkorábbi szakaszában lehetséges. A betegség azonosítása ebben a fázisban a túlérzékeny diagnózis PCR segítségével történő meghatározását segíti elő. Az első tünetek, amelyek a májkárosodás gyanúját okozzák egy vírus által okozott oknak, okot kell jelenteniük egy szakértővel. Ha a diagnózis megerősítést nyer, a kezelést azonnal meg kell kezdeni. Ez javítja a prognózist és növeli annak valószínűségét, hogy sok éven át egészséges állapotban tartsák a májat.